[發明專利]一種高通量篩選賴氨酸脫羧酶的方法有效
| 申請號： | 202110356560.0 | 申請日： | 2021-04-01 |
| 公開（公告）號： | CN112899262B | 公開（公告）日： | 2023-06-09 |
| 發明（設計）人： | 陳可泉;王昕;許晟;歐陽平凱;劉福建;陳昌主;譚偉民;馬仁 | 申請（專利權）人： | 南京工業大學 |
| 主分類號： | C12N9/88 | 分類號： | C12N9/88;C12N15/70;C12N15/60;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江蘇圣典律師事務所 32237 | 代理人： | 仲凌霞;肖明芳 |
| 地址： | 211816 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 通量 篩選 賴氨酸 脫羧酶 方法 | ||
1.一種高通量篩選賴氨酸脫羧酶的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)向賴氨酸營養缺陷型菌株中導入含賴氨酸脫羧酶基因的質粒，得到重組工程菌；
(2)將步驟(1)所得重組工程菌于含賴氨酸的培養基中培養，通過測定OD600篩選表達賴氨酸脫羧酶的重組工程菌；
步驟(1)中，所述賴氨酸營養缺陷型菌株的構建方法為將大腸桿菌工程菌株MG1655中的lysA基因敲除。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述賴氨酸脫羧酶的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述含賴氨酸脫羧酶基因的質粒的核苷酸序列如SEQ?ID?No.5所示。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述含賴氨酸脫羧酶基因的質粒的構建方法為將PCR復制大腸桿菌工程菌株MG1655中的賴氨酸脫羧酶與載體質粒ptrc酶切后連接。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，PCR復制的引物中，上游引物帶有Nco?I酶切位點，下游引物帶有BamH?I酶切位點。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述載體質粒ptrc的核苷酸序列如SEQ?IDNo.4所示。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述含賴氨酸的培養基中賴氨酸的濃度為0.1-2g/L。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述培養為先在LB培養基中預培養4-8h，再轉接到含賴氨酸的培養基中二次培養10-14h。
9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述培養的溫度為34-44℃。
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