[發(fā)明專利]用于紅薯粉條中木薯特異基因檢測的LMCP引物組在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110355883.8 | 申請日： | 2021-04-01 |
| 公開（公告）號： | CN112961909A | 公開（公告）日： | 2021-06-15 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王永真 | 申請（專利權）人： | 許昌學院 |
| 主分類號： | C12Q1/6844 | 分類號： | C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 濟南鼎信專利商標代理事務所(普通合伙) 37245 | 代理人： | 曹玉琳 |
| 地址： | 461000*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 紅薯 粉條 木薯 特異 基因 檢測 lmcp 引物 | ||
1.一種用于紅薯粉條中木薯特異基因檢測的LMCP引物組，其特征在于：包括以下兩條引物：
P：5`-TGTCCGAGGGTCTTTTTTCACGGCTATCGGTGGTTGG-3`；如SEQ ID NO.1所示；
D：5`-GCCGTGGGCGAACTTTTGGTCCCGTTCGGCAGAC-3`；如SEQ ID NO.2所示。
2.用于紅薯粉條中木薯特異基因檢測的試劑盒，其特征在于：包括權利要求1所述的LMCP引物組。
3.權利要求1所述的LMCP引物組在檢測紅薯粉條中木薯特異基因中的應用。
4.權利要求2所述的試劑盒在檢測紅薯粉條中木薯特異基因中的應用。
5.一種檢測紅薯粉條中木薯特異基因的方法，其特征在于：取待測樣品，抽提樣品DNA，用權利要求1所述的引物組或權利要求2所述的試劑盒進行恒溫擴增；若擴增結果圖中出現指數曲線，則該樣品含有木薯rRNA特異基因片段；若擴增結果中沒有出現特異梯狀譜帶，則樣品中不含有木薯rRNA特異基因片段。
6.根據權利要求5所述的檢測紅薯粉條中木薯特異基因的方法，其特征在于：所述恒溫擴增核酸片段的方法包括以下步驟：
(1)退火步驟：由于熔解溫度差異，引物P上的P1部分與模板上的互補序列退火；
(2)鏈替代反應步驟：引物P在DNA聚合酶(大片段)催化下等溫擴增，合成一條雙鏈，并取代下一條單鏈，其中取代下來的單鏈作為引物D的模板，在DNA聚合酶(大片段)催化下等溫擴增合成與步驟(1)相似的雙鏈，啟動新一輪擴增；
(3)退火步驟：由于熔解溫度差異，引物P上的P1部分與步驟(2)合成的雙鏈模板上的互補序列退火；
(4)鏈替代反應步驟：引物P在DNA聚合酶(大片段)催化下等溫擴增，合成一條與步驟2相同的雙鏈，該雙鏈作為步驟(3)的模板啟動新一輪擴增，同時取代下來一條單鏈；
(5)退火步驟：引物D上的D1部分與步驟(4)取代下來的單鏈退火；
(6)合成反應步驟：引物D以步驟(5)的單鏈為模板在DNA聚合酶(大片段)催化下等溫擴增，合成一條雙鏈；
(7)退火步驟：由于熔解溫度差異，引物P上的P1部分與步驟(6)合成的雙鏈模板上的互補序列退火；
(8)鏈替代反應步驟：引物P在DNA聚合酶(大片段)催化下等溫擴增，合成一條雙鏈，同時取代下來一條與步驟(4)相同的單鏈，啟動新一輪擴增；
(9)退火步驟：由于熔解溫度差異，引物P上的P1部分與步驟(8)合成的雙鏈模板上的互補序列退火；
(10)鏈替代反應步驟：引物P在DNA聚合酶(大片段)催化下等溫擴增，合成一條與步驟(8)相同的雙鏈，啟動新一輪擴增，同時取代下來一條單鏈；
(11)指數擴增初始結構的形成步驟：由于自身的互補結構，步驟(10)取代下的單鏈形成頸環(huán)結構，此頸環(huán)結構即為指數擴增的初始結構。
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