[發明專利]一種測定煙絲中氨基酸的方法

在審

• 申請號: 202110355398.0
• 申請日: 2021-04-01
• 公開（公告）號: CN113030338A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 彭黔榮;鄧葵;王宇;趙麗琴;馮淑艷;楊敏;張文;蔡元青
• 申請（專利權）人: 貴州中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 上海華誠知識產權代理有限公司 31300
• 代理人: 徐穎聰

1.一種測定煙絲中氨基酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)標準曲線的建立

制備氨基酸標準工作液，對所述氨基酸標準工作液進行衍生化反應，用超高效液相色譜-檢測器測定衍生化的所述氨基酸標準工作液中各氨基酸的色譜峰保留時間和色譜峰面積，以色譜峰保留時間定性，然后根據所述氨基酸標準工作液的摩爾濃度及色譜峰面積繪制出所述標準曲線，其中，超高效液相色譜檢測的色譜條件包括：

流動相包括流動相A和流動相B，

流動相A為甲酸、乙腈、水組成的1L混合溶液溶解20mmol甲酸銨后得到的溶液，其中，甲酸、乙腈、水組成的混合溶液中，甲酸、乙腈、水的體積百分比分別為0.5％、1％、98.5％；

流動相B為甲酸、乙腈組成的混合溶液，其中，甲酸、乙腈的體積百分比分別為1.6％、98.4％；

流速0.7mL/min；

梯度洗脫程序如下，

0～0.54min：流動相A 99.9％，流動相B 0.1％；0.54～5.74min：流動相A 90.9％，流動相B 9.1％；5.74～7.74min：流動相A 82％，流動相B 18.0％；7.74～8.04min：流動相A43.4％，流動相B 56.6％；8.04～8.64min：流動相A 40.4％，流動相B 59.6％；8.64～8.73min：流動相A 99.8％，流動相B 0.2％；8.73～9.50min：流動相A 99.9％，流動相B0.1％；

(2)煙絲中氨基酸的測定

制備煙絲提取液，對所述煙絲提取液進行衍生化反應，用超高效液相色譜-檢測器測定衍生化的所述煙絲提取液中各氨基酸的色譜峰保留時間和色譜峰面積，根據所述氨基酸標準工作液中各氨基酸的色譜峰保留時間對所述煙絲中各氨基酸定性，用外標法計算煙絲中各氨基酸的含量，其中，超高效液相色譜檢測的色譜條件與步驟(1)中相同。

2.如權利要求1所述的測定煙絲中氨基酸的方法，其特征在于，所述氨基酸分別為組氨酸His、天冬酰胺Asn、絲氨酸Ser、谷氨酰胺Gln、精氨酸Arg、甘氨酸Gly、天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、蘇氨酸Thr、丙氨酸Ala、4-氨基丁酸GABA、脯氨酸Pro、胱氨酸Cys、賴氨酸Lys、酪氨酸Tyr、甲硫氨酸Met、纈氨酸Val、異亮氨酸Ile、亮氨酸Leu、苯丙氨酸Phe、色氨酸Trp。

3.如權利要求1所述的測定煙絲中氨基酸的方法，其特征在于，所述衍生化反應的反應條件為：取10～15μL待衍生化溶液，在步驟(1)中待衍生化溶液為氨基酸標準工作液，在步驟(2)中待衍生化溶液為煙絲提取液，在10～15μL待衍生化溶液中加70～105μL緩沖溶液，混合均勻后加入20～30μL衍生劑溶液，混合均勻后進行封口，放置后于50～60℃水浴中進行衍生化反應10～15min，完畢放置于4℃環境。

4.如權利要求3所述的測定煙絲中氨基酸的方法，其特征在于，所述衍生劑溶液中的衍生劑為6-羥基喹啉基-N-羥基琥珀亞氨基甲酸酯。

5.如權利要求3所述的測定煙絲中氨基酸的方法，其特征在于，所述衍生劑溶液中衍生劑的濃度為2.5mg/L，溶劑為乙腈。

6.如權利要求3所述的測定煙絲中氨基酸的方法，其特征在于，所述緩沖溶液為硼酸緩沖溶液，所述硼酸緩沖溶液的pH為8.6～9.0。

7.如權利要求1所述的測定煙絲中氨基酸的方法，其特征在于，所述超高效液相色譜檢測的色譜條件還包括：色譜柱為ACCQ-TAGTMULTRAC18柱，填料粒徑為1.7μm，色譜柱的內徑為2.1mm，色譜柱的長度為100mm；進樣量為1μL；樣品室溫度為10℃，柱溫為55℃。

8.如權利要求1所述的測定煙絲中氨基酸的方法，其特征在于，所述檢測器為熒光檢測器串聯光電二極管陣列檢測器，所述熒光檢測器條件：激發波長266nm，發射波長473nm；所述光電二極管陣列檢測器條件：吸收波長260nm。