[發明專利]一種蛋白酶熒光分光光度快速檢測方法在審
| 申請號： | 202110354305.2 | 申請日： | 2021-04-01 |
| 公開（公告）號： | CN113092426A | 公開（公告）日： | 2021-07-09 |
| 發明（設計）人： | 張曉霞;劉瑞芳 | 申請（專利權）人： | 張曉霞;劉瑞芳 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64;G01N1/38 |
| 代理公司： | 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471 | 代理人： | 王睿 |
| 地址： | 014000 內蒙古自治區包頭市*** | 國省代碼： | 內蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蛋白酶 熒光 分光 光度 快速 檢測 方法 | ||
1.一種蛋白酶熒光分光光度快速檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將孵育緩沖液、FITC酪蛋白基質和待測樣品混合后，得到第一混合液；
(2)對所述第一混合液進行離心處理，得到上清液和沉淀物；
(3)向所述上清液中加入TCA溶液后，得到第二混合液；
(4)將所述第二混合液與分析緩沖液混合后，得到第三混合液；
(5)將所述第三混合液置于熒光分光光度計中，記錄在波長為485nm的激發光下的熒光強度，并監測波長為535nm的發射波強度；
(6)將所述發射波強度與標準曲線進行對照，得到待測樣品中酪蛋白的濃度。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，選用20μl孵育緩沖液、20μlFITC酪蛋白基質和10μl待測樣品。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述待測樣品中含有濃度為0-2.5μg/ml的酪蛋白。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述孵育緩沖液中，含有濃度為20mmol/L的磷酸二氫鈉和濃度為150mmol/L的氯化鈉；所述FITC酪蛋白基質為FITC-熒光素標記酪蛋白。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述離心處理的轉速為10000r/min，時間為10min。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述TCA溶液的加入量為150μl，TCA濃度為6.1N。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述分析緩沖液中，含有濃度為500mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用鹽酸將pH值調至8.5。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，將2μl第二混合液與200μl分析緩沖液混合后移入黑色96孔板的孔中，得到第三混合液。
9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，將30μl第二混合液與3μl分析緩沖液混合后移入試管中，得到第三混合液。
10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)中，熒光分光光度計中裝有485nm的濾光片，能夠提供波長為485nm的激發光；并設定發射波波長為535nm，記錄發射波強度。
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