[發明專利]一種臍帶血造血干細胞制備基礎上提取富血小板血漿的方法

在審

• 申請號: 202110349072.7
• 申請日: 2021-03-31
• 公開（公告）號: CN113046317A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 朱學義;韋丹;尤培華;薛曉鋒;王迎耀;張云國
• 申請（專利權）人: 河南省遺傳資源細胞庫有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789;C12N5/078
• 代理公司: 南京君陶專利商標代理有限公司 32215
• 代理人: 嚴海晨

1.一種臍帶血造血干細胞制備基礎上提取富血小板血漿的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一、標本前處理，標本表面的消毒處理，目的是去除表面污漬，和可能的細菌進入血液中；

步驟二、去除紅細胞，臍帶血標本中加入羥乙基淀粉，羥乙基淀粉可與紅細胞膜上的負電荷結合，使紅細胞凹面相貼而使得沉降速度加快，利用紅細胞和白細胞的沉降速度的差異來實現去除紅細胞；

步驟三、收集臍帶血血漿，將上步驟去除紅細胞的轉移袋再次離心，上清液轉移至新袋中，即收集血漿；造血干細胞按照臍帶血凍存工藝規程進行凍存；

步驟四、制備富血小板血漿，上步驟得到的血漿離心去除紅細胞，收集上清液再次離心，留取沉淀，即得臍帶血富血小板血漿；

步驟五、富血小板血漿的鑒定及造血干細胞鑒定，步驟四獲得的富血小板血漿進行表面標志物的流式檢測和計數。

2.根據權利要求1所述的一種臍帶血造血干細胞制備基礎上提取富血小板血漿的方法，其特征在于：所述步驟二中，臍帶血標本按照臍帶血量：羥乙基淀粉=5：1加入所需羥乙基淀粉量。離心500rpm、7min，分為三層，上層血漿，中層干細胞，下層紅細胞。夾緊150ml轉移袋的止血夾，緩慢的將干細胞及血漿擠壓至另外一個250ml轉移袋。

3.根據權利要求1所述的一種臍帶血造血干細胞制備基礎上提取富血小板血漿的方法，其特征在于：所述步驟三中，將上步驟250ml轉移袋離心1800rpm，5min，分為清晰的三層，上層血漿，中層干細胞，下層少許的紅細胞。打開150ml轉移袋的止血夾，緩慢的將250ml轉移袋上層血漿擠壓排出至150ml轉移袋中。

4.根據權利要求1所述的一種臍帶血造血干細胞制備基礎上提取富血小板血漿的方法，其特征在于：所述步驟四中，將收集的血漿離心1500prm 5min，此步驟再次去除紅細胞；收集的血漿再次離心2500prm，10min。將沉淀上層2-3cm以上的黃色澄清上清液棄去，下層即為富血小板血漿。

5.根據權利要求1所述的一種臍帶血造血干細胞制備基礎上提取富血小板血漿的方法，其特征在于：所述步驟五中，分離得到的臍帶血富血小板血漿和造血干細胞進行細胞活率、全自動血球計數儀分析、流式細胞術分析，用于鑒定臍帶血富血小板血漿和造血干細胞。