[發(fā)明專利]一種檢測(cè)摩氏摩根菌抗體的間接ELISA檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110349008.9
• 申請(qǐng)日: 2021-03-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113063942B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉永夏;劉建柱;張美華;鄧干臻;李克鑫;韓博;才冬杰;張立梅;胡莉萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/569
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)摩氏摩根菌抗體的間接ELISA檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用。所述間接ELISA檢測(cè)試劑盒是以摩氏摩根菌重組LPP蛋白作為包被抗原；所述摩氏摩根菌重組LPP蛋白的制備方法如下：以SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列作為編碼LPP蛋白的基因，構(gòu)建重組表達(dá)載體，通過(guò)真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)摩氏摩根菌重組LPP蛋白。本發(fā)明首次建立了檢測(cè)摩氏摩根菌抗體的間接ELISA檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法具有簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定、特異性強(qiáng)、靈敏度高等特性，能夠用于摩氏摩根菌抗體的檢測(cè)，為摩氏摩根菌的流行病學(xué)調(diào)查以及早期防治提供了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)摩氏摩根菌抗體的間接ELISA檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)

摩氏摩根菌(Morganella morganii)屬于摩根菌屬，摩根菌屬只有摩氏摩根菌一個(gè)種。摩氏摩根菌常寄生于人和動(dòng)物的腸道內(nèi)，系臨床不常見(jiàn)的但是重要的條件致病菌。摩氏摩根菌可引起呼吸道、傷口、泌尿道、膽囊、血液及眼部等部位的感染。同時(shí)摩氏摩根菌對(duì)青霉素類(lèi)、苯唑西林、頭孢菌素、頭孢泊肟、林可酰胺類(lèi)抗生素，糖肽類(lèi)、磷霉素等都存在天然耐藥性，導(dǎo)致摩氏摩根菌感染治療時(shí)藥物選擇受到限制。因此，早期檢測(cè)摩氏摩根菌對(duì)于摩氏摩根菌的臨床防治將具有十分重要的意義。

由于摩氏摩根菌在臨床的分離率比較低，對(duì)摩氏摩根菌的生物學(xué)特性、致病機(jī)制等的研究尚處于起步階段，其技術(shù)成熟度較低。目前對(duì)于摩氏摩根菌的檢測(cè)主要采用PCR檢測(cè)方法，但PCR檢測(cè)對(duì)設(shè)備要求較高，不適宜于基層養(yǎng)殖場(chǎng)使用。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)是將已知的抗原或抗體包被在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，加入相應(yīng)的酶底物后發(fā)生顏色反應(yīng)，通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，通過(guò)顏色反應(yīng)的深淺檢測(cè)樣本中相應(yīng)抗體或抗原含量的檢測(cè)技術(shù)。ELISA檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性好、經(jīng)濟(jì)安全等特點(diǎn)而在臨床上廣泛應(yīng)用，尤其適用于基層檢測(cè)。但由于摩氏摩根菌難以進(jìn)行分離，其臨床分離率在國(guó)內(nèi)僅為革蘭氏陰性菌的0.5％，若以摩氏摩根菌的全菌蛋白作為ELISA檢測(cè)的包被抗原難以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模應(yīng)用；另外，對(duì)于摩氏摩根菌相關(guān)基因和蛋白功能研究分析較少，難以選擇摩氏摩根菌的何種蛋白作為包被抗原，而且，包被抗原的制備比較困難，存在蛋白不表達(dá)或表達(dá)量低、蛋白純化困難等問(wèn)題。因此，目前還未見(jiàn)有利用間接ELISA檢測(cè)摩氏摩根菌抗體的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)摩氏摩根菌抗體的間接ELISA檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用。可以對(duì)摩氏摩根菌抗體抗體進(jìn)行快速、有效的檢測(cè)，以監(jiān)測(cè)養(yǎng)殖場(chǎng)中摩氏摩根菌的流行情況，從而有利于摩氏摩根菌的臨床防治。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一方面，提供摩氏摩根菌重組LPP蛋白作為包被抗原在制備檢測(cè)摩氏摩根菌抗體的ELISA檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用；

所述摩氏摩根菌重組LPP蛋白是由如下方法制備而成：

以SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列作為編碼LPP蛋白的基因，構(gòu)建重組表達(dá)載體，通過(guò)真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)摩氏摩根菌重組LPP蛋白。

本發(fā)明的第二方面，提供一種檢測(cè)摩氏摩根菌抗體的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，所述間接ELISA檢測(cè)試劑盒是以摩氏摩根菌重組LPP蛋白作為包被抗原；

所述摩氏摩根菌重組LPP蛋白的制備方法如下：

以SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列作為編碼LPP蛋白的基因，構(gòu)建重組表達(dá)載體，通過(guò)真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)摩氏摩根菌重組LPP蛋白。

優(yōu)選的，重組表達(dá)載體的構(gòu)建方法為：使用限制性內(nèi)切酶NheⅠ、EcoRⅠ對(duì)pcDNA3.1(+)載體和SEQ ID NO.1所示的編碼LPP蛋白的基因進(jìn)行雙酶切處理，再用T4DNA連接酶對(duì)酶切后的產(chǎn)物進(jìn)行連接。