[發(fā)明專利]一種用于橡膠樹的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、誘導(dǎo)橡膠樹體細(xì)胞胚發(fā)生的方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110347031.4
• 申請(qǐng)日: 2021-03-31
• 公開（公告）號(hào): CN112841037B
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 顧曉川;彭素娜;華玉偉;黃天帶;黃華孫;戴雪梅;徐正偉;吳日智;楊秀祝;周世俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所
• 主分類號(hào): C12N5/00
• 分類號(hào): C12N5/00;A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 張夢(mèng)澤

1.一種用于橡膠樹的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，調(diào)整硝酸銨的濃度為330～1800mg/L，五水硫酸銅濃度為0.1～0.3mg/L，煙酸濃度為2.5～7.5mg/L，VB1濃度為0.25～0.75mg/L，添加生物素0.01～0.1mg/L，葉酸0.1～1mg/L，天冬酰胺100～600mg/L，水解酪蛋白100～600mg/L，蔗糖50～90g/L，Phytagel 2～3g/L，椰子水40～90ml/L和激素組合物，以胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的體積計(jì)，所述激素組合物由以下質(zhì)量濃度的組分組成：2,4-D 0.5～1mg/L、Zeatin 0.5～1mg/L和Picloram 0.5～1mg/L；或者2,4-D 0.5～1mg/L、KT 0.5～1mg/L和Picloram 0.5～1mg/L。

2.一種基于權(quán)利要求1所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)橡膠樹體細(xì)胞胚發(fā)生的方法，其特征在于，包括如下步驟：摘取綠色至黃色、完全未開放的雄花并消毒；從消毒后的雄花中將雄蕊剝出并接種到胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到胚性愈傷組織；將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)接到體細(xì)胞胚分化培養(yǎng)基，進(jìn)行分化培養(yǎng)，得到體細(xì)胞胚；所述分化培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，調(diào)整其大量元素至原來(lái)的4/5，添加蔗糖70g/L，Phytagel 2.2g/L，6-BA 0.5mg/L、KT 3mg/L、NAA 0.05mg/L、GA3 0.5mg/L和ABA 1mg/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述消毒的方法包括如下步驟：將所述雄花用體積百分含量為70％～75％酒精水溶液表面消毒30～60s；酒精水溶液表面消毒后，用質(zhì)量百分含量為0.1％氯化汞水溶液消毒10～15min；氯化汞水溶液消毒后，用無(wú)菌水沖洗。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件為：溫度26～28℃，相對(duì)濕度65％～75％，黑暗條件下培養(yǎng)40～60d。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述分化培養(yǎng)的條件為：溫度24～26℃，相對(duì)濕度65％～75％，黑暗條件下培養(yǎng)40～60d。

6.權(quán)利要求1所述的用于橡膠樹的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基或權(quán)利要求2～5任一項(xiàng)所述的方法在橡膠樹體胚苗培養(yǎng)中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1所述的用于橡膠樹的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基或權(quán)利要求2～5任一項(xiàng)所述的方法在提高橡膠樹體細(xì)胞胚發(fā)生率中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求1所述的用于橡膠樹的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基或權(quán)利要求2～5任一項(xiàng)所述的方法在提高橡膠樹花藥體細(xì)胞胚發(fā)生率中的應(yīng)用。