[發(fā)明專利]一種糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110345899.0
• 申請(qǐng)日: 2021-03-31
• 公開（公告）號(hào): CN113075143B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張神賜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 奧研生物科技（南京）有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 南京禾易知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32320
• 代理人: 宋萍

1.一種糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑，其特征在于，所述糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑包括：A₁衍化試劑、A₂抑制試劑和B₁顯化試劑；

A₁衍化試劑包括：0.002mol/L 8-羥基奎林水溶液,0.2~0.3ml/L 果糖基肽氧化酶，50ml/L 蒸餾水；

A₂抑制試劑包括：0.05~0.015mg/L α-葡萄糖苷酶抑制劑，0.1~0.2mg/L 二肽基肽酶-4抑制劑，50ml/L 蒸餾水；

B₁顯化試劑包括：0.01~0.02mg/L 4,4'-二氨基聯(lián)苯，5~10ml/L 乙酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑，其特征在于：所述A₁衍化試劑、A₂抑制試劑和B₁顯化試劑均采用斷口式密封包裝，其中A₁衍化試劑和A₂抑制試劑需要進(jìn)行冷藏貯存，而B₁顯化試劑不可以進(jìn)行冷藏貯存，且需要進(jìn)行避光處理。

3.一種糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑的檢測(cè)方法，基于權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述 糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑，其中，包括如下步驟：

步驟一：采集患者靜脈2ml血液，并加入抗凝劑靜置，隨后將采血樣本放入到離心機(jī)中進(jìn)行操作，2~4min后取出血液樣本，通過(guò)滴管進(jìn)行樣本的提取；

步驟二：將滴管中的血液樣本滴入到培養(yǎng)皿中，取出A₁衍化試劑并將其頭部掰開，然后通過(guò)試管提取2~3ml的試劑滴入到培養(yǎng)皿中的血液樣本上，完成后靜置觀察3min；

步驟三：上述步驟中為空腹采樣檢測(cè)方法，而患者為飽腹?fàn)顟B(tài)下提取的血液樣本在加入A₁衍化試劑后，還需加入A₂抑制試劑，A₂抑制試劑與A₁衍化試劑的加入比例為1:2；

步驟四：在A試劑加入并且靜置完成后，同樣通過(guò)滴管提取定量的B₁顯化試劑滴加到血液樣本的培養(yǎng)中，在試劑滴加后需要將培養(yǎng)皿移放到暗室中進(jìn)行反應(yīng)觀察；

步驟五：在出現(xiàn)反應(yīng)后，將裝有反應(yīng)樣本的培養(yǎng)皿放入到顯色儀器中進(jìn)行檢測(cè)，最終通過(guò)測(cè)定吸光度求出HbA1c的百分濃度。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟二中，A₁衍化試劑中的8-羥基奎林水溶液配合蒸餾水作為血液樣本的預(yù)處理液，與此同時(shí)果糖基肽氧化酶與血液中的糖化血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，在蛋白酶的作用下切斷HbA1c的β鏈N末端的糖化二肽，而糖化二肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成過(guò)氧化氫。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟三中，飽腹患者受消化系統(tǒng)的影響血液中仍會(huì)存在大量的未反應(yīng)糖分，而血紅蛋白發(fā)生糖化反應(yīng)將不可逆，A₂抑制試劑中的α-葡萄糖苷酶抑制劑和二肽基肽酶-4抑制劑均為糖分的抑制類藥物，其中α-葡萄糖苷酶抑制劑包括：糖-100，糖-100利用枯草芽孢桿菌M0RI制備，通過(guò)利用枯草芽孢桿菌M0RI制備時(shí)產(chǎn)生的1-脫氧野尻霉素可以對(duì)小腸絨毛里面的α-葡萄糖苷酶有很好的抑制活性。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟四中，完成反應(yīng)后的培養(yǎng)皿中會(huì)分解出過(guò)氧化物酶，當(dāng)過(guò)氧化物酶與B₁顯化試劑中的4,4'-二氨基聯(lián)苯接觸后會(huì)發(fā)生氧化反應(yīng)，促使聯(lián)苯胺氧化成藍(lán)色化合物，其反應(yīng)方程式為：RH₂+H₂O₂→R+2H₂O。