[發(fā)明專利]黃牛DYNC1I2基因CNV標(biāo)記快速輔助檢測(cè)生長(zhǎng)性狀的方法及專用試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110343708.7
• 申請(qǐng)日: 2021-03-30
• 公開（公告）號(hào): CN112831576B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃永震;丁曉婷;賀花;李欣淼;劉賢;柴亞楠;李克麗;牛夢(mèng)曉;喬小玉;鄭中華;張子敬;施巧婷;王二耀;茹寶瑞;胡沈榮;王建欽;雷初朝;陳宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6851
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種檢測(cè)牛DYNC1I2基因拷貝數(shù)變異的方法，其特征在于：包括以下步驟：

以牛基因組DNA為模板，以引物對(duì)P1以及引物對(duì)P2為引物，分別通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增DYNC1I2基因的拷貝數(shù)變異區(qū)域以及作為內(nèi)參的BTF3基因的部分片段，然后根據(jù)定量結(jié)果鑒定牛DYNC1I2基因的拷貝數(shù)變異類型；

所述的引物對(duì)P1為：

上游引物F1：5’-AAGTACAAGTGCCTCAAACTTCT-3’

下游引物R1：5’-CCAAACCGTGAAAATAAGACCA-3’

所述的引物對(duì)P2為：

上游引物F2：5’-AACCAGGAGAAACTCGCCAA-3’

下游引物R2：5’-TTCGGTGAAATGCCCTCTCG-3’；

所述牛DYNC1I2基因的拷貝數(shù)變異類型是根據(jù)2*2^-ΔΔCt將定量結(jié)果分為的三類：多拷貝型，2*2^-ΔΔCt2；缺失型，2*2^-ΔΔCt2；正常型，2*2^-ΔΔCt＝2；

在皮南牛中，拷貝數(shù)變異類型為多拷貝型的個(gè)體在體斜長(zhǎng)這個(gè)生長(zhǎng)性狀上顯著優(yōu)于缺失型及正常型的個(gè)體；在秦川牛中，拷貝數(shù)變異類型為缺失型或正常型的個(gè)體在胸寬和腰角寬這兩個(gè)生長(zhǎng)性狀上顯著優(yōu)于多拷貝型的個(gè)體，拷貝數(shù)變異類型為缺失型的個(gè)體在坐骨端寬這生長(zhǎng)性狀上顯著優(yōu)于多拷貝型的個(gè)體；在夏南牛中，拷貝數(shù)變異類型為缺失型或正常型的個(gè)體在十字部高這個(gè)生長(zhǎng)性狀上顯著優(yōu)于多拷貝型的個(gè)體；在云嶺牛中，拷貝數(shù)變異類型為多拷貝型的個(gè)體在胸深這個(gè)生長(zhǎng)性狀上顯著優(yōu)于缺失型的個(gè)體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種檢測(cè)牛DYNC1I2基因拷貝數(shù)變異的方法，其特征在于：所述引物對(duì)P1的擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為135bp，引物對(duì)P2的擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為166bp。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種檢測(cè)牛DYNC1I2基因拷貝數(shù)變異的方法，其特征在于：所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的擴(kuò)增體系包括10ng/μL模板DNA?1μL以及10μmol/L的引物對(duì)P1或引物對(duì)P2所對(duì)應(yīng)的上、下游引物各0.5μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種檢測(cè)牛DYNC1I2基因拷貝數(shù)變異的方法，其特征在于：所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性2min；95℃變性10s，60℃退火20s，39個(gè)循環(huán)。

5.如權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法在黃牛分子標(biāo)記輔助選擇育種中的應(yīng)用。