[發明專利]黃牛CHRDL1基因CNV標記快速輔助檢測生長性狀的方法及其應用

有效

• 申請號: 202110342428.4
• 申請日: 2021-03-30
• 公開（公告）號: CN112813175B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 黃永震;丁曉婷;賀花;李欣淼;柴亞楠;劉賢;李克麗;杜雪兒;鄭中華;喬小玉;郎利敏;張子敬;施巧婷;王二耀;茹寶瑞;胡沈榮;王建欽;雷初朝;陳宏
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種檢測牛CHRDL1基因拷貝數變異的方法，其特征在于：包括以下步驟：

以牛基因組DNA為模板，以引物對P1以及引物對P2為引物，分別通過實時熒光定量PCR擴增CHRDL1基因的拷貝數變異區域以及作為內參的BTF3基因的部分片段，然后根據定量結果鑒定牛CHRDL1基因的拷貝數變異類型；

所述引物對P1為：

上游引物F1：5’-GCAGCCCATCTTCCACTTTT-3’

下游引物R1：5’-AGCCTGAGATAAGAGGTCTCCA-3’

所述引物對P2為：

上游引物F2：5’-AACCAGGAGAAACTCGCCAA-3’

下游引物R2：5’-TTCGGTGAAATGCCCTCTCG-3’；

所述拷貝數變異類型是根據2*2^-ΔΔCt將定量結果分為的三類：多拷貝型，2*2^-ΔΔCt2；缺失型，2*2^-ΔΔCt2；正常型，2*2^-ΔΔCt＝2；

在皮南牛中，拷貝數變異類型為缺失型的個體在尻長這個生長性狀上顯著優于正常型及多拷貝型的個體；在秦川牛中，拷貝數變異類型為缺失型的個體在胸深這個生長性狀上顯著優于多拷貝型的個體；在夏南牛中，拷貝數變異類型為正常型的個體在體重這個生長性狀上顯著優于缺失型及多拷貝型的個體；在云嶺牛中，拷貝數變異類型為缺失型的個體在腰角寬這個生長性狀上顯著優于多拷貝型的個體。

2.根據權利要求1所述一種檢測牛CHRDL1基因拷貝數變異的方法，其特征在于：所述引物對P1的擴增產物片段大小為153bp，引物對P2的擴增產物片段大小為166bp。

3.根據權利要求1所述一種檢測牛CHRDL1基因拷貝數變異的方法，其特征在于：所述實時熒光定量PCR的擴增體系包括10ng/μL模板DNA?1μL以及10μmol/L的引物對P1或引物對P2所對應的上、下游引物各0.5μL。

4.根據權利要求1所述一種檢測牛CHRDL1基因拷貝數變異的方法，其特征在于：所述實時熒光定量PCR的反應程序為：95℃預變性2min；95℃變性10s，60℃退火20s，39個循環。

5.如權利要求1-4中任意一項權利要求所述的方法在黃牛分子標記輔助選擇育種中的應用。