[發(fā)明專利]一種基于ISBP標記鑒定甘薯品種的引物組、鑒定方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110334289.0
• 申請日: 2021-03-29
• 公開（公告）號: CN112831595B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孟羽莎;王寅;劉雷;顧興國;項超;賴齊賢;湯勇
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 邱啟旺

1.一種ISBP引物組，其特征在于，包括IbISBP14,IbISBP18,IbISBP19,IbISBP31,IbISBP57,IbISBP60,IbISBP67,IbISBP69,IbISBP72和IbISBP79引物對；

所述引物對IbISBP14為SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；

所述引物對IbISBP18為SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；

所述引物對IbISBP19為SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列；

所述引物對IbISBP31為SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列；

所述引物對IbISBP57為SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列；

所述引物對IbISBP60為SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列；

所述引物對IbISBP67為SEQ ID NO：13所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：14所示的核苷酸序列；

所述引物對IbISBP69為SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：16所示的核苷酸序列；

所述引物對IbISBP72為SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：18所示的核苷酸序列；

和所述引物對IbISBP79為SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：20所示的核苷酸序列。

2.一種權(quán)利要求1所述ISBP引物組在鑒定或輔助鑒定甘薯品種中的應(yīng)用。

3.一種PCR試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的10對PCR引物對。

4.根據(jù)權(quán)利要求 3所述的PCR試劑盒，其特征在于，各對引物對中各條引物的摩爾比為1:1，每個PCR試劑中各對引物對中各條引物的濃度為10μmol/L。

5.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述ISBP引物組鑒定甘薯品種的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)分別使用IbISBP14,IbISBP18,IbISBP19,IbISBP31,IbISBP57,IbISBP60,IbISBP67, IbISBP69,IbISBP72和IbISBP79引物對對不同已知甘薯種質(zhì)資源的DNA進行ISBP-PCR引物擴增得到不同甘薯種質(zhì)資源的10對ISBP引物擴增產(chǎn)物；

(2)電泳檢測步驟(1)中得到的待檢測甘薯的10對ISBP-PCR引物擴增產(chǎn)物，根據(jù)電泳結(jié)果確定有效位點，在相同遷移位置上，擴增帶型以“1”、“0”分別表示條帶的有和無，構(gòu)建每個甘薯種質(zhì)資源的10對ISBP-PCR引物擴增產(chǎn)物的“1”、“0”數(shù)字指紋圖譜，每個甘薯種質(zhì)資源包含10個數(shù)字指紋圖譜，所有甘薯種質(zhì)資源的數(shù)字指紋圖譜構(gòu)成甘薯種質(zhì)資源數(shù)字指紋圖譜庫；

(3)將待鑒定甘薯樣品依照步驟(1)和步驟(2)進行ISBP-PCR引物擴增并電泳得到待鑒定甘薯種質(zhì)資源的數(shù)字指紋圖譜；將待鑒定甘薯種質(zhì)資源的數(shù)字指紋圖譜與甘薯種質(zhì)資源數(shù)字指紋圖譜庫進行比對：

若待鑒定甘薯種質(zhì)資源的數(shù)字指紋圖譜與圖譜庫中某一種質(zhì)資源甘薯數(shù)字指紋圖譜中至少有2個帶型不同，則待鑒定甘薯樣品與該種質(zhì)資源甘薯為或候選為不同品種；若甘薯樣品中某兩個甘薯種質(zhì)資源的數(shù)字指紋圖譜中最多有1個帶型不同，則該兩個品種為或候選為相同品種。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，10對ISBP-PCR引物擴增產(chǎn)物，根據(jù)電泳結(jié)果確定有效位點大小近似為：

IbISBP14：710，680，450，310，280，260，255，250，205，195，190和180bp；

IbISBP18：897，800，516，480，370，325，300，287，210和205bp；

IbISBP19：358，290，220，196，193，190，120和110bp；

IbISBP31：529，500，494，426，400，298，215，200，196和190bp；

IbISBP57：300，229，194，150，144和90bp；

IbISBP60：790，597，530，439，271和259bp；

IbISBP67：600，586，512，504，482，407，315，300，289，284，216，204，69，58，49和44bp；

IbISBP69：529，509，489，393，319，309，278，249，206，192，159，135和122bp；

IbISBP72：373，292，276，269，229，179，171，143，138，130和113bp；

IbISBP79：999，900，789，635，320，300和186bp。