[發(fā)明專利]一種基于可見光催化的脂質(zhì)碳碳雙鍵異構(gòu)體質(zhì)譜成像方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110333377.9
• 申請(qǐng)日: 2021-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN113063838B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫成龍;王曉;馬春霞;李麗麗;王岱杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省分析測(cè)試中心
• 主分類號(hào): G01N27/64
• 分類號(hào): G01N27/64;G01N1/28
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

本發(fā)明提供一種基于可見光催化的脂質(zhì)碳碳雙鍵異構(gòu)體質(zhì)譜成像方法及其應(yīng)用，屬于質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過在組織切片表面噴涂一種新型衍生化試劑，然后在可見光催化下進(jìn)行組織原位衍生化反應(yīng)，進(jìn)一步采用MALDI質(zhì)譜成像技術(shù)對(duì)衍生化后的組織切片進(jìn)行質(zhì)譜成像分析，實(shí)現(xiàn)了生物組織中脂質(zhì)C＝C雙鍵異構(gòu)體的原位可視表征，因此具有良好的實(shí)際推廣應(yīng)用之價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于可見光催化的脂質(zhì)碳碳雙鍵異構(gòu)體質(zhì)譜成像方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

公開該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

脂質(zhì)類成分如脂肪酸和磷脂等在構(gòu)建細(xì)胞生物膜、傳遞生物信號(hào)、調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝等方面起著不可或缺的作用。越來越多的證據(jù)表明，機(jī)體中脂質(zhì)成分的變化與腫瘤、阿爾茨海默病、老年癡呆癥等多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。采用質(zhì)譜成像技術(shù)(Massspectrometry imaging,MSI)對(duì)生物組織中脂質(zhì)類成分進(jìn)行原位可視化檢測(cè)，可以掌握機(jī)體生理和病理?xiàng)l件下脂質(zhì)分子的空間變化特征，可以增進(jìn)我們對(duì)脂質(zhì)分子生物學(xué)作用的認(rèn)識(shí)。值得注意的是，不飽和脂質(zhì)分子的脂肪酸鏈通常存在碳碳雙鍵(C＝C)，這就導(dǎo)致生物體中會(huì)出現(xiàn)多種不同的C＝C雙鍵脂質(zhì)異構(gòu)體，而不同的C＝C雙鍵脂質(zhì)異構(gòu)體在機(jī)體中的作用往往是不同的。

質(zhì)譜成像技術(shù)可以通過對(duì)組織樣品中脂質(zhì)分子按空間位置逐點(diǎn)進(jìn)行掃描檢測(cè)，獲得脂質(zhì)離子強(qiáng)度與位置關(guān)系的數(shù)據(jù)陣，然后通過質(zhì)譜成像軟件對(duì)不同脂質(zhì)離子按照其強(qiáng)度和空間位置進(jìn)行可視化重構(gòu)，最終實(shí)現(xiàn)多種脂質(zhì)分子的成像分析。但是，對(duì)于生物組織中不同脂質(zhì)C＝C異構(gòu)體而言，由于他們具有相同的質(zhì)荷比(m/z)值，難以采用質(zhì)譜成像技術(shù)直接對(duì)不同脂質(zhì)C＝C異構(gòu)體進(jìn)行可視化分析。

為了解決這一問題，有研究者采用紫外光催化的Paternò-Büchi(PB)衍生化反應(yīng)對(duì)脂質(zhì)中的C＝C雙鍵位置進(jìn)行定位，然后采用質(zhì)譜碰撞誘導(dǎo)解離(CID)-MS/MS分析不同脂質(zhì)C＝C異構(gòu)體的特征碎片離子。進(jìn)一步靶向提取不同脂質(zhì)C＝C異構(gòu)體的碎片離子在組織不同區(qū)域的分布特征，就可實(shí)現(xiàn)不同脂質(zhì)C＝C異構(gòu)體的質(zhì)譜成像分析。但是，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，直接在組織切片上進(jìn)行Paternò-Büchi(PB)衍生化反應(yīng)容易受到外界環(huán)境的影響，而且對(duì)反應(yīng)條件的要求非?？量獭Ａ硗?，Paternò-Büchi(PB)衍生化反應(yīng)需要在紫外光照射下進(jìn)行，而紫外光照射不僅容易引起副反應(yīng)的發(fā)生，而且可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)者造成健康損害。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種基于可見光催化衍生化的脂質(zhì)C＝C雙鍵異構(gòu)體MALDI質(zhì)譜成像方法及其應(yīng)用。通過在組織切片表面噴涂一種新型衍生化試劑，然后在可見光催化下進(jìn)行組織原位衍生化反應(yīng)，進(jìn)一步采用MALDI質(zhì)譜成像技術(shù)對(duì)衍生化后的組織切片進(jìn)行質(zhì)譜成像分析，實(shí)現(xiàn)了生物組織中脂質(zhì)C＝C雙鍵異構(gòu)體的原位可視表征。

為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供3-苯甲酰吡啶在基于可見光催化衍生化的脂質(zhì)C＝C雙鍵異構(gòu)體MALDI質(zhì)譜成像中的應(yīng)用。

其中，所述應(yīng)用中，所述3-苯甲酰吡啶作為衍生化試劑使用。

本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供一種基于可見光催化衍生化的脂質(zhì)C＝C雙鍵異構(gòu)體MALDI質(zhì)譜成像方法，所述方法至少包括：

將衍生化試劑噴涂到待測(cè)樣品的表面，采用可見光照射催化衍生化反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)結(jié)束后得到不飽和脂質(zhì)的衍生化產(chǎn)物；

將上述衍生化處理后的待測(cè)樣品噴涂MALDI基質(zhì)，然后進(jìn)行MALDI質(zhì)譜成像分析。

其中，所述衍生化試劑是3-苯甲酰吡啶，其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示：