[發(fā)明專(zhuān)利]一種新冠病毒膠體金檢測(cè)試紙及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110332403.6
• 申請(qǐng)日: 2021-03-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113092778B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏鵬海;朱兆奎;梁權(quán);趙百慧
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海伯杰醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/532;G01N33/531
• 代理公司: 上海碩力知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31251
• 代理人: 林曉青

1.一種新冠病毒膠體金檢測(cè)試紙的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S10、利用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液；

S20、制備金標(biāo)記S蛋白和N蛋白：利用碳酸鉀分別將制備好的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至7.5±0.5和9.5±0.5，以分別形成膠體金溶液A和膠體金溶液B，分別再用雙蒸水稀釋標(biāo)記S蛋白和N蛋白至濃度為0.5-2mg/ml，然后將S蛋白逐滴加入攪拌的膠體金A溶液中，N蛋白逐滴加入攪拌的膠體金B(yǎng)溶液中，保持?jǐn)嚢?0-30min，分別膠體金A溶液和膠體金B(yǎng)溶液中加10％BSA至終濃度為0.2％-0.5%，封閉裸露金顆粒， 4℃下繼續(xù)攪拌20-30min，并以6000r/min離心20-30min，濃縮備用；

S30、利用緩沖溶液1稀釋S20中的金標(biāo)記S蛋白，并均勻鋪在金標(biāo)結(jié)合物墊上以形成金標(biāo)S蛋白結(jié)合物墊；利用緩沖溶液2處理金標(biāo)結(jié)合物墊后并將S20中的金標(biāo)記N蛋白噴于處理好的金標(biāo)結(jié)合物墊上以形成金標(biāo)N蛋白結(jié)合物墊；

S40、將抗人IgM、抗人IgG和羊抗兔分別用緩沖溶液3稀釋?zhuān)缓髮⒖谷薎gM、抗人IgG和羊抗兔包被于硝酸纖維素膜上以分別形成第一檢測(cè)線(xiàn)、第二檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)，37-45℃干燥12-18小時(shí)備用；

S50、利用緩沖溶液4浸泡樣品墊，在室溫、濕度＜20％的條件下過(guò)夜干燥，切割備用；

S60、按樣品墊、金標(biāo)S蛋白結(jié)合物墊、金標(biāo)N蛋白結(jié)合物墊、硝酸纖維素膜、吸水墊順序粘附于支撐底板上組裝試紙，并切割包裝；

其中，步驟S10中采用球形瓶、懸臂式磁力攪拌槳配合數(shù)顯夾套式磁力攪拌器燒制顆粒均一的直徑為35-45nm的膠體金顆粒，分光光度計(jì)測(cè)其最高峰在530±5nm，OD值在1.0±0.1；

所述S30中緩沖溶液1由Tris-Hcl、蔗糖、海藻糖、BSA、PEG20000、月桂基聚氧乙烯醚硫酸鈉、吐溫-20組成，其中，所述Tris-Hcl摩爾濃度為10-100mM，蔗糖質(zhì)量終濃度為3％-10％，海藻糖質(zhì)量終濃度為1％-5％，BSA質(zhì)量終濃度為1％-3％，PEG20000質(zhì)量終濃度為0.05％-0.5％，月桂基聚氧乙烯醚硫酸鈉質(zhì)量終濃度為0.1％-1.0％，吐溫-20質(zhì)量終濃度為0.1％-0.5％；

所述S30中緩沖溶液2由Tris-Hcl、蔗糖、BSA、酪蛋白和月桂基聚氧乙烯醚硫酸鈉組成，其中，所述Tris-Hcl摩爾濃度為10-100mM，蔗糖質(zhì)量終濃度為3％-10％，BSA質(zhì)量終濃度為0.5％-3％，酪蛋白質(zhì)量終濃度為0.1％-1.0％，月桂基聚氧乙烯醚硫酸鈉質(zhì)量終濃度為0.1％-1.0％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新冠病毒膠體金檢測(cè)試紙的制備方法，其特征在于：所述S40中緩沖溶液3由 PBS和蔗糖組成，其中PBS摩爾濃度為10-100mM，蔗糖質(zhì)量終濃度為1％-5％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新冠病毒膠體金檢測(cè)試紙的制備方法，其特征在于：所述S50中緩沖溶液4由Tris-Hcl、BSA、酪蛋白、 PEG20000和吐溫-20組成，其中Tris-Hcl摩爾濃度為10-100mM，BSA質(zhì)量終濃度為0.5％-5％，酪蛋白質(zhì)量終濃度為0.1％-2％，PEG20000質(zhì)量終濃度為0.1％-1.0％，吐溫-20質(zhì)量終濃度為0.1％-0.5％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新冠病毒膠體金檢測(cè)試紙的制備方法，其特征在于：

所述新冠病毒膠體金檢測(cè)試紙用于檢測(cè)人全血、血清和血漿中的新冠病毒IgM和IgG抗體；

和/或；

所述的金標(biāo)結(jié)合物墊和樣品墊由玻璃纖維制備而成；

和/或；

所述第一檢測(cè)線(xiàn)與所述第二檢測(cè)線(xiàn)之間的距離以及所述第二檢測(cè)線(xiàn)與質(zhì)控線(xiàn)兩兩之間的距離為3-8mm；

和/或；

在所述S30和S40之間還包括S31，所述S31分別對(duì)所述S30中的金標(biāo)S蛋白結(jié)合物墊和金標(biāo)N蛋白結(jié)合物墊真空冷凍干燥備用。

5.一種新冠病毒膠體金檢測(cè)試紙，其特征在于：采用如權(quán)利要求1-4任一所述的制備方法制備而成。