[發(fā)明專利]石斛夜光丸中人參成分真?zhèn)蔚臋z測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110332010.5
• 申請日: 2021-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN112903869A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅軼;朱韜;何頌華;林敬開;呂軼峰
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 南寧市來來專利代理事務(wù)所(普通合伙) 45118
• 代理人: 來光業(yè)

1.一種石斛夜光丸中人參成分真?zhèn)蔚臋z測方法，其特征在于，所述方法是采用高效液相色譜法檢測待測樣品中擬人參皂苷F₁₁的含量，具體步驟如下：

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充柱；以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫；洗脫程序?yàn)椋?～20min，10%→30%A，20～45min，30%A；流速為1.0mL/min；用高溫型蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按擬人參皂苷F₁₁峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；

（2）對照品溶液制備：取擬人參皂苷F₁₁對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含100μg擬人參皂苷F₁₁的溶液，即得對照品溶液；

（3）供試品溶液的制備：取石斛夜光丸水蜜丸，研碎，取約6g；或取石斛夜光丸小蜜丸或大蜜丸，剪碎，取約9g；精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入體積濃度為70%的甲醇溶液100mL，密塞，稱定重量，加熱回流1h，取出，放冷，再稱定重量，用體積濃度為70%的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液50mL，蒸干，殘?jiān)铀?5mL使溶解，用水飽和的正丁醇溶液振搖提取4次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次50mL，再用水飽和的正丁醇溶液50mL洗滌，分取正丁醇液，減壓濃縮，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；

（4）測定：分別精密吸取對照品溶液5μL、20μL，供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算擬人參皂苷F₁₁的含量；

（5）結(jié)果判斷：石斛夜光丸中含擬人參皂苷F₁₁，水蜜丸每1g不得過40μg，小蜜丸每1g不得過27μg，大蜜丸每丸不得過151μg。

2.一種石斛夜光丸中人參成分真?zhèn)蔚臋z測方法，其特征在于，所述方法是采用高效液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行檢測，具體步驟如下：

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充柱；以0.1%甲酸溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫；洗脫程序?yàn)椋?～6min，90%A，6～20min，90%→50%A，20～21min，50%→10%A，21～26min，10%A，26～27min，10%→90%A，27～30min，90%A；流速為0.25mL/min；用高溫型蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按擬人參皂苷F₁₁峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；

（2）質(zhì)譜條件：電噴霧離子源；ESI^-，多反應(yīng)監(jiān)測；選擇m/z845.5→653.4和m/z845.5→490.9作為檢測離子對；當(dāng)擬人參皂苷F₁₁對照品溶液進(jìn)樣為1μL時(shí)，2對檢測離子對的MRM色譜峰的信噪比均應(yīng)大于3:1；

（3）對照品溶液制備：取擬人參皂苷F₁₁對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含1μg擬人參皂苷F₁₁的溶液，即得對照品溶液；

（4）供試品溶液的制備：取石斛夜光丸水蜜丸，研碎，取約6g；或取石斛夜光丸小蜜丸或大蜜丸，剪碎，取約9g；精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入體積濃度為70%的甲醇溶液100mL，密塞，稱定重量，加熱回流1h，取出，放冷，再稱定重量，用體積濃度為70%的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液50mL，蒸干，殘?jiān)铀?5mL使溶解，用水飽和的正丁醇溶液振搖提取4次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次50mL，再用水飽和的正丁醇溶液50mL洗滌，分取正丁醇液，減壓濃縮，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液100μL，置1mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm微孔濾膜濾過，即得；

（5）測定：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1μL，注入高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，測定，即得；

（6）結(jié)果判斷：當(dāng)供試品溶液檢出色譜峰的保留時(shí)間與擬人參皂苷F₁₁對照品一致，并且所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度對照品溶液的離子相對豐度比一致，相對偏差不超過以下規(guī)定的范圍：k＞50，最大允許偏差為±20%，20＜k≤50，最大允許偏差為±25%，10＜k≤20，最大允許偏差為±30%，k≤10，最大允許偏差為±50%；則可判定石斛夜光丸樣品中存在擬人參皂苷F₁₁。