[發明專利]一種膠體金免疫層析試紙條的制備方法

在審

• 申請號: 202110331518.3
• 申請日: 2021-03-29
• 公開（公告）號: CN113009129A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 王秉;閆琳;馬維維;胡智文;萬軍民
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 浙江永航聯科專利代理有限公司 33304
• 代理人: 蔡鼎

本發明涉及免疫層析檢測技術領域，公開了一種膠體金免疫層析試紙條的制備方法，包括：分別將玻璃纖維素膜和聚酯膜于預處理浸泡液中浸泡、烘干；將標記好的單克隆抗體封閉、離心、濃縮，將濃縮的膠體金溶液噴涂到聚酯膜上，烘干，制備成金標結合墊；將金標結合墊和玻璃纖維素膜組裝成膠體金免疫層析試紙條。本發明預處理浸泡液能有效去除商品金標墊和樣品墊中的基質，改善金標墊和樣品墊的理化性質；經本發明預處理浸泡液處理后的試紙條，膠體金顆粒標記、釋放均勻，金標結合物穩定性有極大提高。

技術領域

本發明涉及免疫層析檢測技術領域，尤其涉及一種膠體金免疫層析試紙條的制備方法。

背景技術

膠體金免疫層析技術是一種將抗原抗體免疫反應與膠體金標記示蹤技術結合用于抗原、抗體含量定性定量檢測的技術。抗體的膠體金標記主要是通過膠體金與蛋白質之間的靜電作用力進行牢固結合的，由于其快速、簡便、成本低、穩定性好等優點，特別是為現場快速檢測叩開了一扇嶄新的大門。

金標墊和樣品墊是膠體金免疫層析試紙的重要組成部分，金標墊和樣品墊的預處理對后續檢測有不同程度的影響。金標墊的主要作用是吸附標記有相應蛋白質抗體的金納米顆粒，決定了后續金納米顆粒的靈敏度和特異性、釋放效果等。目前金標墊的標記方法多為將標記好的濃縮的金顆粒噴涂在玻璃纖維素膜上，在使用過程中發現，該方法制備的金標結合墊標記量小，在檢測過程中釋放不完全，影響檢測結果的準確度和靈敏性。樣品墊在使用前也要進行預處理，樣品墊中的基質影響很大，不處理直接應用于檢測時，存在較大的問題，例如：出現假陽性和假陰性反應、陰陽性對比度不高、不能有效的促進金標結合墊中的金顆粒釋放等。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種膠體金免疫層析試紙條的制備方法。

本發明的具體技術方案為：一種膠體金免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟：

1）材料選擇：選擇玻璃纖維素膜和聚酯膜，避光陰涼處保存。

玻璃纖維素膜和聚酯膜的老化是因為膜上的水分蒸發，使膜變得疏水，帶電荷并變脆。儲存膜一般要求是避光密封，過干或過濕都不利。

2）浸泡：將預處理浸泡液添加至容器中，分別將玻璃纖維素膜和聚酯膜浸沒25-35s。

玻璃纖維素膜和聚酯膜進行預處理，增大吸水速率，去除基質上的電荷影響，確保膜的功能均一性。

3）烘干：將浸潤后的玻璃纖維素膜和聚酯膜分別移至35-40℃下烘干。

4）制備金標結合墊：用制備好的膠體金溶液標記相應單克隆抗體，將標記好的單克隆抗體封閉、離心、濃縮后得到濃縮的膠體金溶液，使用噴金劃膜機將濃縮的膠體金溶液噴涂到步驟3）所得聚酯膜上，35-40℃烘干，制備成金標結合墊。

將標記好的膠體金用噴金劃膜機噴涂到聚酯膜上，在其上形成均勻的金標結合墊。

5）組裝：將所得金標結合墊和步驟3）所得玻璃纖維素膜組裝成膠體金免疫層析試紙條。

作為優選，步驟1）中，所述預處理浸泡液包括以下質量百分數的組分：

磷酸氫二鈉：0.142%~0.363%，磷酸二氫鉀：0.024%~0.027%，氯化鈉：0.8%，氯化鉀：0.02%，BSA：1%，蔗糖：1%，Tween-20:0.2%，溶解在超純水中。

作為優選，步驟1）中，所述預處理浸泡液包括以下質量百分數的組分：