[發明專利]具有廣譜性識別A型流感病毒NP蛋白的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 202110331083.2
• 申請日: 2021-03-26
• 公開（公告）號: CN113024666B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 顧敏;柳蘇函;劉秀梵;徐曉婷;葛志闖;王曉泉
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/535;C12R1/91
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

本發明公開了2株具有廣譜性識別A型流感病毒NP蛋白的單克隆抗體及其應用。所述的單克隆抗體分別命名為3D4(CCTCCNO:C202177)、4B9(CCTCCNO:C202176)，3D4的重鏈及輕鏈可變區的氨基酸序列分別如SEQ ID No.1和SEQ ID No.3所示，4B9重鏈及輕鏈可變區的氨基酸序列分別如SEQ ID No.5和SEQ ID No.3所示。本發明公開的2株單克隆抗體分別針對NP蛋白的不同抗原表位，除了均能夠與H1～H11等不同HA亞型的禽流感病毒發生反應，還均能夠結合H1和H3亞型的豬流感與人流感病毒，在識別不同亞型、不同宿主來源的A型流感病毒中均呈現良好的廣譜性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，主要涉及兩株可穩定分泌具有廣譜性識別A型流感病毒NP蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株，同時涉及該兩株雜交瘤細胞株所分泌的兩種單克隆抗體及其應用。

背景技術

正黏病毒科的流感病毒可分為A、B、C、D四型，其中A型流感病毒(Influenza Avirus,IAV)感染的宿主范圍最為廣泛，包括人、禽、豬、馬、犬等多種動物，并能造成流感的大流行，無論是對畜禽養殖還是人類健康均造成了極為嚴重的危害(Shuo Su,Min Gu,DiLiu,et al.Epidemiology,Evolution,and Pathogenesis of H7N9 Influenza Virusesin Five Epidemic Waves since 2013in China[J].Trends in Microbiology,2017,25(9):713-728)。IAV的基因組由8個分節段的單股負鏈RNA構成，分別為PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS基因節段，共編碼包括血凝素HA、神經氨酸酶NA等在內的10余種蛋白。其中，核衣殼蛋白NP與基質蛋白M1的抗原性差異是不同型別流感病毒的分型依據；而HA和NA的抗原性差異又可作為進一步區分IAV不同亞型的依據(Jeffery KTaubenberger and JohnCKash.Influenza Virus Evolution,Host Adaptation,and Pandemic Formation[J].Cell HostMicrobe,2010,7(6):440-451)。目前報道，IAV存在H1-H18共18種HA亞型和N1-N11共11種NA亞型(Khristine Kaith S Lloren,Taehyung Lee,Jin Jung Kwon,etal.Molecular Markers for Interspecies Transmission of Avian Influenza Virusesin Mammalian Hosts[J].International journal of molecular sciences,2017,18(12):2706)。禽流感病毒中，H9N2、H7N9和包括H5N1、H5N6等多種NA亞型的H5NX是全球范圍內嚴重影響禽類生產的主要亞型，同時它們也因造成了不少人感染甚至死亡的病例而具有相當的公共衛生意義(John Steel and Anice C Lowen.Influenza A virusreassortment[J].Current topics in microbiology and immunology,2014,385:377-401)。在人流感病毒和豬流感病毒中，主要流行的是H1N1和H3N2亞型，該兩種亞型均導致過人類的流感大流行并成為了引起季節性流感的穩定組份(https://www.who.int/influenza/surveillance_monitoring/updates/en/)；豬群中流行的歐亞類禽(Eurasianavian-like,EA)H1N1病毒還被指出是最有可能引起下一次人類流感大流行的動物流感病毒(Huanliang Yang,Yan Chen,Chuanling Qiao,et al.Prevalence,genetics,andtransmissibility in ferrets of Eurasian avian-like H1N1 swine influenzaviruses[J].Proc Natl Acad Sci U S A.2016,113(2):392-397)。此外，隨著H10N8、H6N1等低致病性禽流感病毒也被報道可以直接跨種傳播到人并致病，研究人員推測任何一種禽流感病毒亞型都可能具有成為人畜共患病原的潛能(Damien A M Philippon,Peng Wu,Benjamin JCowling,et al.Avian Influenza Human Infections at the Human-AnimalInterface[J].J Infect Dis.2020,222(4):528-537)。因此，亟需建立一種高效、快速，并能夠廣譜性識別IAV的檢測方法，這對于有效預防和控制禽流感、豬流感、人流感等不同宿主來源的人畜流感，以及可能的流感疫情的早期預警，均具有重要的現實意義(Qian Xiao,Zhenwei Bi,Lu Yao,et al.Novel protein microarray for the detection of avianinfluenza virus antibodies and simultaneous distinction of antibodies againstH5 and H7 subtypes[J].Avian Pathology,2019,48(6):528-536)。