[發(fā)明專利]具有廣譜殺菌活性的肽及其制備方法與應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110330158.5 | 申請日： | 2021-03-29 |
| 公開（公告）號： | CN112961218B | 公開（公告）日： | 2022-10-14 |
| 發(fā)明（設計）人： | 譚墾;溫心馨 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學院西雙版納熱帶植物園 |
| 主分類號： | C07K7/08 | 分類號： | C07K7/08;C12N15/12;C12N15/10;A61K38/10;A61P31/04 |
| 代理公司： | 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業(yè)) 53116 | 代理人： | 姜開俠;姜開遠 |
| 地址： | 666303 云南*** | 國省代碼： | 云南;53 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 具有 廣譜 殺菌 活性 及其 制備 方法 應用 | ||
本發(fā)明公開了一種具有廣譜殺菌活性的肽及其制備方法與應用，所述肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述肽的制備方法，是根據(jù)所述肽的氨基酸序列SEQ ID NO.1，標準固相肽合成程序人工合成所述肽；或是將包括SEQ ID NO.2所示序列的121~162位核苷酸的編碼所述肽的核苷酸序列克隆表達載體，并將重組后的DNA轉(zhuǎn)化入宿主細胞，進行重組表達，純化后獲得所述肽。所述肽的應用為在制備抗金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌、大腸桿菌感染藥物中的應用。本發(fā)明提供的肽具有廣譜抗菌性、無溶血性、避免細菌產(chǎn)生耐藥性且最小抑菌濃度低等特點，具有較大的應用空間。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及具有廣譜殺菌活性的肽及其制備方法與應用。
背景技術(shù)
近年來，抗生素濫用現(xiàn)象普遍存在，導致細菌出現(xiàn)耐藥性。抗菌肽的發(fā)現(xiàn)，成為替代抗生素的潛在開發(fā)藥物。傳統(tǒng)抗菌肽存在很多缺陷，例如，某些抗菌肽的抗菌效果具有單一性，只對某種菌株有抑制作用；部分抗菌肽只有在較大濃度的用藥量大時才會產(chǎn)生抑菌效果等。細菌耐藥性、傳統(tǒng)抗生素的缺陷等問題的出現(xiàn)迫使人們研發(fā)新型抗菌肽。
胡蜂，別名黃蜂、長腿蜂，虎頭蜂等，是一種分布廣泛，社會價值高的膜翅目昆蟲。胡蜂毒液中含有豐富的生物活性物質(zhì)，其中包括多種胺類、小肽類和高分子量蛋白質(zhì)，如酶、過敏原和毒素等。近些年來胡蜂毒液在諸多方面發(fā)揮了巨大作用，相關(guān)研究表明胡蜂毒液是藥理等新型活性物質(zhì)開發(fā)的潛在來源。近年來，胡蜂抗菌肽Mastoparan的應用領(lǐng)域也較為廣泛，Mastoparan是胡蜂蜂毒中的一種由十四個氨基酸組成的單鏈陽離子十四肽，在抗菌檢測和癌癥治療等方面都有顯著成效。因此，研究開發(fā)新的高效低毒的胡蜂抗菌肽Mastoparan是極其重要的。
本發(fā)明旨在提供一種具有廣譜殺菌活性的新型肽，并研究其抑菌機制，以給廣譜抗菌、抵制抗生素耐藥性和腫瘤治療等方面的新型藥物的研發(fā)提供模板。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一目的在于提供一種具有廣譜殺菌活性的肽，本發(fā)明的第二目的在于提供編碼所述肽的基因及其制備方法，本發(fā)明的第三目的在于提供所述肽的生物活性的預測方法，本發(fā)明的第四目的在于提供所述肽的應用。
本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的，一種具有廣譜殺菌活性的肽，所述胡蜂其氨基酸序列為INLRAIAALAKKLL，如SEQ ID NO.1所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本發(fā)明的第二目的是這樣實現(xiàn)的，編碼所述肽的基因的開放閱讀框的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示序列的121~162位核苷酸。
本發(fā)明編碼所述肽的基因的制備方法，包括以下步驟：
1）提取黑尾胡蜂毒液總RNA，進行反轉(zhuǎn)錄PCR得到cDNA第一鏈；
2）以所述cDNA第一鏈作為模板，進行PCR擴增獲得含所述肽編碼序列的PCR擴增產(chǎn)物；
3）步驟2的PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離并回收目的片段，得到目標物。
本發(fā)明的第三目的是這樣實現(xiàn)的，所述肽的生物活性的預測方法，是通過生物信息學手段分析所述肽的氨基酸序列的理化參數(shù)、螺旋輪投影圖和三維結(jié)構(gòu)圖，從而預測得出所述肽的生物活性。
本發(fā)明所述肽的應用是在制備抗金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌、大腸桿菌感染藥物中等抗菌制劑中的應用。
本發(fā)明的有益效果為：
1）本發(fā)明提供了一種新肽，本發(fā)明通過生物信息學手段，預測得出本新肽具有α-雙螺旋結(jié)構(gòu)、帶有正電荷、兩親性等特征，進一步預測得出其具有抗菌活性，本預測活性的方法能夠避免實驗損耗，降低實驗成本。
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