[發(fā)明專利]一種免疫細(xì)胞培養(yǎng)基體系及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110320044.2
• 申請(qǐng)日: 2021-03-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112941023B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 路建偉;王義;張舉善
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東清慧生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783
• 代理公司: 北京同恒源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 董林利

本發(fā)明具體涉及一種免疫細(xì)胞培養(yǎng)基體系及其應(yīng)用，屬于生物試劑領(lǐng)域，所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基體系包括接種培養(yǎng)基和擴(kuò)增培養(yǎng)基，所培養(yǎng)出的免疫細(xì)胞具有更高的活性，生長(zhǎng)速度較快，殺傷能力更強(qiáng)，降低了大規(guī)模生產(chǎn)細(xì)胞的成本，并且可用于商品化大規(guī)模生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物試劑領(lǐng)域，具體涉及一種免疫細(xì)胞培養(yǎng)基體系及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

免疫細(xì)胞是指參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞。體外擴(kuò)增免疫細(xì)胞具有以下幾個(gè)特點(diǎn)：增殖速度快，主要效用細(xì)胞CD3+CD56+T(抗腫瘤活性)可大量增殖，且細(xì)胞活性也大大增強(qiáng)；殺傷活性強(qiáng)，遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)的淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞；殺瘤譜廣，不受MHC限制，具有廣譜殺腫瘤和病毒的作用；免疫細(xì)胞的體外擴(kuò)增需要外源性細(xì)胞因子，如IL-2、IL-7、IL-12等的輔助，這些因子控制著人免疫系統(tǒng)內(nèi)特異性細(xì)胞的擴(kuò)增及其生物學(xué)活性。細(xì)胞因子是免疫活性細(xì)胞和其它細(xì)胞分泌的具有多種生物活性的多肽或蛋白質(zhì),這些細(xì)胞因子是重要的信息傳遞物質(zhì),特別在免疫、炎癥和造血系統(tǒng)等生物學(xué)反應(yīng)過(guò)程中具有重要的作用。近幾年,細(xì)胞因子的研究已成為生物學(xué)研究中最活躍的領(lǐng)域之一。新的細(xì)胞因子不斷被發(fā)現(xiàn),大量的細(xì)胞因子正在或?qū)⒁獞?yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床。細(xì)胞因子的研究帶動(dòng)了整個(gè)免疫學(xué)的發(fā)展。其應(yīng)用展現(xiàn)出廣闊的前景。免疫細(xì)胞過(guò)繼免疫治療現(xiàn)已成為生物治療的重要分支，它克服了以往效應(yīng)細(xì)胞增殖數(shù)量少，需大量輸注IL-2，提升白細(xì)胞效價(jià)較低及副作用大等的缺點(diǎn)，對(duì)于促進(jìn)患者免疫系統(tǒng)的重建、骨髓凈化、微小殘留病灶的清除以及防止腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等均具有重要的意義.目前研究發(fā)現(xiàn)，常用的幾種免疫細(xì)胞細(xì)胞體外擴(kuò)增方案擴(kuò)增產(chǎn)物在擴(kuò)增倍數(shù)、細(xì)胞表型上并沒(méi)有明顯差異；但在免疫細(xì)胞殺傷活性方面，經(jīng)過(guò)體外大規(guī)模擴(kuò)增之后，IL-2、IL-15、IL-7、OKT3擴(kuò)增產(chǎn)物的殺傷活性明顯優(yōu)于普通培養(yǎng)的免疫細(xì)胞的擴(kuò)曾情況，其中加入IL-2的效果最明顯。在此基礎(chǔ)之上，可以進(jìn)一步地探討和優(yōu)化擴(kuò)增方案，從而獲得高效高純度的免疫細(xì)胞。

作為免疫細(xì)胞體外增殖誘導(dǎo)的重要載體即培養(yǎng)基，直接關(guān)系著體外誘導(dǎo)結(jié)果，包括增殖數(shù)量、殺瘤效果等等。因?yàn)閭鹘y(tǒng)培養(yǎng)基添加了大量的動(dòng)物源性血清存在安全隱患，所以現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用無(wú)血清培養(yǎng)基，排除動(dòng)物源性污染和血清導(dǎo)致的不確定性，在血源性細(xì)胞的培養(yǎng)中可從自身血樣中提取的小量血清即可滿足，甚至可以無(wú)需添加血清。目前，無(wú)血清培養(yǎng)基已用于血源性細(xì)胞的培養(yǎng)、真核系統(tǒng)中重組蛋白的表達(dá)、病毒及寄生。培養(yǎng)基作為免疫細(xì)胞體外擴(kuò)增的主要載體，直接關(guān)系著其體外誘導(dǎo)的結(jié)果，包括增殖數(shù)量、殺瘤效果等各種生物活性指標(biāo)。在基礎(chǔ)研究中，為了促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，傳統(tǒng)培養(yǎng)基添加了動(dòng)物源性血清等生物活性物質(zhì)，故而存在血清批次造成的質(zhì)量不穩(wěn)定以及動(dòng)源性污染等問(wèn)題，因而越來(lái)越多的公司或者研究機(jī)構(gòu)致力于研究成分明確的不含動(dòng)物血清的培養(yǎng)基，即無(wú)血清培養(yǎng)基(SerumFreeMedium，SFM)。無(wú)血清培養(yǎng)基的出現(xiàn)是培養(yǎng)基發(fā)展歷程上的一個(gè)里程碑，一般意義上的無(wú)血清培養(yǎng)基，是在各種基礎(chǔ)培養(yǎng)基(如DMEM、RPMI1640、Ham’sF-12等)的基礎(chǔ)上，添加各類可替代血清功能的組分配制而成細(xì)胞培養(yǎng)基，如人血清白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素等生物大分子物質(zhì)，以及混合脂類、水解蛋白、微量元素、細(xì)胞因子等。

目前，市場(chǎng)上有很多免疫細(xì)胞培養(yǎng)：如X-VIVO，RPMI-1640，AIM-V，ALY505N，KBM551/561/581系列等，這些培養(yǎng)基各有各的優(yōu)缺點(diǎn)。無(wú)血清培養(yǎng)基具有許多含血清培養(yǎng)基不具有的優(yōu)點(diǎn)，尤其是在細(xì)胞免疫治療領(lǐng)域。首先可避免血清批次間的質(zhì)量變動(dòng)，提高細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性；其次，血清對(duì)細(xì)胞有一定的毒性作用以及可能的血清源性污染都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)很大的影響。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種免疫細(xì)胞培養(yǎng)基體系，本發(fā)明目的之二在于提供一種免疫細(xì)胞培養(yǎng)基體系在體外擴(kuò)增NK細(xì)胞和CIK細(xì)胞中的應(yīng)用。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

1、一種免疫細(xì)胞培養(yǎng)基體系，所述培養(yǎng)基體系包括：