[發(fā)明專利]基于快速熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的山核桃耐高溫性評價(jià)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110318863.3
• 申請日: 2021-03-25
• 公開（公告）號(hào): CN113176235A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金松恒;葉博予;李雪芹;劉洋
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江農(nóng)林大學(xué)暨陽學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64;G01N1/44
• 代理公司: 北京中政聯(lián)科專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11489
• 代理人: 何磊

1.基于快速熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的山核桃耐高溫性評價(jià)方法，其特征在于，包括以下具體步驟：

S1：樣品收集和培養(yǎng)：選用不同品種山核桃幼苗栽于培養(yǎng)缽，作為樣品放置苗圃中進(jìn)行緩苗養(yǎng)護(hù)；

S2：樣品熱處理：將幼苗設(shè)立對照組和實(shí)驗(yàn)組，分別放于熱處理環(huán)境，熱處理環(huán)境因素均設(shè)置相同，并且設(shè)定不同的脅迫溫度；

S3：OJIP曲線和參數(shù)：測定樣品葉片的OJIP曲線與相關(guān)的葉綠素?zé)晒鈪?shù)；

S4：分析與評價(jià)：對獲得的OJIP曲線進(jìn)行JIP-test分析，對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與繪圖，進(jìn)行單因素方差分析(one-wayANOVA)和Duncan多重比較分析(α＝0.05)，將分析結(jié)果統(tǒng)計(jì)整理后得到評價(jià)結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于快速熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的山核桃耐高溫性評價(jià)方法，其特征在于，所述S3中，測定樣品葉片的OJIP曲線的具體步驟為：

S301：測定前將樣品均暗適應(yīng)20min，向暗適應(yīng)后的葉片連續(xù)照射1s飽和脈沖紅光(650nm，3500μmol·m^-2·s^-1)；

S302：選取植株從上往下第4-5片成熟葉片作為測定葉片，采用多功能植物效率分析儀測定樣品葉片快速葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線，即OJIP曲線，并獲得以下葉綠素?zé)晒鈪?shù)，包括初始熒光Fo(50μs)、反應(yīng)中心(RCs)、K點(diǎn)(300μs)的熒光水平Fk、J點(diǎn)(2ms)的熒光水平FJ、I點(diǎn)(30ms)的熒光水平FI和P點(diǎn)(0.3-2s)處的最大熒光強(qiáng)度FM。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于快速熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的山核桃耐高溫性評價(jià)方法，其特征在于，所述S2和S3中，每天對樣品進(jìn)行快速葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線的測定，每個(gè)品種的山核桃幼苗選取6株，并且對每株植物進(jìn)行兩次測量，每次測量后，將植物繼續(xù)熱處理。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于快速熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的山核桃耐高溫性評價(jià)方法，其特征在于，所述S4中，對獲得的OJIP曲線的參數(shù)對照表格中的公式加以計(jì)算，轉(zhuǎn)換為本發(fā)明中所選用的JIP-test試驗(yàn)參數(shù)，參照表格為：

表1 OJIP曲線和JIP-test參數(shù)的公式說明

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于快速熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的山核桃耐高溫性評價(jià)方法，其特征在于，所述S4中，進(jìn)行單因素方差分析的具體步驟為：

分析各組樣品的OJIP熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線在不同脅迫溫度時(shí)的表現(xiàn)、分析各組樣品葉片OJIP曲線K相和J相在不同高溫時(shí)的表現(xiàn)、分析，熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)OJIP曲線與熒光強(qiáng)度和溫度之間存在相關(guān)性，因此可以分析不同的樣品葉片在不同高溫脅迫下的傷害程度差異和不同樣品的相對可變熒光(ΔVt)的差異。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于快速熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的山核桃耐高溫性評價(jià)方法，其特征在于，所述S4中，進(jìn)行Duncan多重比較分析(α＝0.05)的具體步驟為：

通過W_K＝W_300μs＝(F_300μs-F_O)/(F_j-F_O)計(jì)算得出W_K和ΔW_K，并分析W_K和ΔW_K在不同溫度的高溫脅迫時(shí)的變化，分析不同樣品在不同溫度的高溫脅迫下ABS/RC和DIo/RC的變化；

分析各組樣品葉片光合性能在不同高溫下的表現(xiàn)：Fv/Fm反映PSⅡ的最大光能轉(zhuǎn)換效率，觀察在不同溫度時(shí)各樣品值的變動(dòng)，同時(shí)根據(jù)各樣品的PI_ABS值對植物的耐熱能力進(jìn)行排序；

分析各組樣品葉片的PSI和PSII電子傳遞在不同高溫的變化，高溫脅迫后樣品電子傳遞連通性越低，表明該樣品對溫度更加敏感。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于快速熒光誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的山核桃耐高溫性評價(jià)方法，其特征在于，所述S2中，熱處理環(huán)境具體設(shè)置為：光照強(qiáng)度為520-680μmol·m^-2·s^-1，空氣相對濕度為65％-75％，每天定時(shí)按量補(bǔ)充土壤水分，土壤相對含水量保持在75％-85％，且設(shè)定脅迫溫度為：輕度高溫30℃晝14h/25℃夜10h、中度高溫35℃晝14h/25℃夜10h，重度高溫40℃晝14h/35℃10h和43℃晝14h/38℃夜10h，以25℃晝14h/20℃夜10h作為對照組(CK)。