[發明專利]一種鏈霉菌改造菌及其在降解羽毛中的應用在審
| 申請號： | 202110318073.5 | 申請日： | 2021-03-25 |
| 公開（公告）號： | CN113106044A | 公開（公告）日： | 2021-07-13 |
| 發明（設計）人： | 羅曉春;梁爽;李志偉;張明舒;陸雯珺;陸德林;鄧俊勁 | 申請（專利權）人： | 華南理工大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/76;C12P1/04;C12R1/465 |
| 代理公司： | 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245 | 代理人： | 蘇運貞 |
| 地址： | 510640 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 霉菌 改造 及其 降解 羽毛 中的 應用 | ||
1.一種鏈霉菌改造菌，其特征在于：
是以鏈霉菌(Streptomyces sp.)SCUT-1為出發菌，利用基因工程技術構建的過表達半胱氨酸雙加氧酶CDO1和蛋白酶Sep39的重組菌。
2.根據權利要求1所述的鏈霉菌改造菌，其特征在于：
所述的半胱氨酸雙加氧酶CDO1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述的蛋白酶Sep39的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.權利要求1或2所述的鏈霉菌改造菌的構建方法，其特征在于：包括如下步驟：
S1、以鏈霉菌SCUT-1的基因組DNA為模板進行PCR擴增得到片段cdo1和sep39；將所得片段經NdeI和EcoRI雙酶切后，分別與經同樣雙酶切的載體pSET152進行連接，制得重組質粒pSET152-cdo1和pSET152-sep39；
S2、以重組質粒pSET152-sep39為模板進行PCR擴增得到片段ermE*p-sep39；使用NdeI對重組質粒pSET152-cdo1進行單酶切，與所得片段ermE*p-sep39進行雙片段重組，制得重組質粒pSET152-cdo1-sep39；
S3、將重組質粒pSET152-cdo1-sep39轉化ET12567/pUZ8002感受態感受態細胞，經含卡那霉素和氯霉素的LB培養基篩選，挑取單克隆進行菌落PCR驗證，制得陽性菌落ET12567/pUZ8002/pSET152-cdo1-sep39；
S4、將陽性菌落ET12567/pUZ8002/pSET152-cdo1-sep39利用接合轉移的方法轉移入鏈霉菌SCUT-1，即獲得所述的鏈霉菌改造菌。
4.根據權利要求3所述的鏈霉菌改造菌的構建方法，其特征在于：
步驟S1中PCR擴增用到的引物及引物序列如下所示：
cdo1-F：5’-TTTACA
cdo1-R：5’-GAGCGA
sep39-F：5’-TTTACA
sep39-R：5’-GAGCGA
步驟S2中PCR擴增用到的引物及引物序列如下所示：
sep39-F-2：5’-CCGCCGACCACTGAGCTAGTATGCATGCGAG-3’；
sep39-R-2：5’-ACAGCTATGACATGATTACGTCAGAGGCCGGACTTGAAC-3’。
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