[發明專利]一種超分子熒光探針檢測氯胺酮的方法

有效

• 申請號: 202110316714.3
• 申請日: 2021-03-24
• 公開（公告）號: CN113075179B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 狄斌;閆昆;胡馳
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 冒艷

本發明公開了一種超分子熒光探針檢測氯胺酮的方法，該熒光探針是基于葫蘆脲[8]主體與原小檗堿型生物堿染料客體的相互作用自組裝形成的，為三元超分子主客體復合物，當氯胺酮作為目標物加入探針中會瞬時引起探針體系中熒光的猝滅，從而通過檢測熒光信號變化實現對樣品中氯胺酮的快速檢測。該方法具有簡便快速，靈敏度高，特異性好，易于實現高通量檢測等優點。

技術領域

本發明涉及熒光探針檢測方法，特別涉及一種超分子熒光探針檢測氯胺酮的方法。

背景技術

氯胺酮在醫學臨床上屬于高效麻醉劑藥品，目前對于氯胺酮的定量檢測手段主要是色譜質譜技術(GC-MS，LC-MS/MS等)和光譜技術(FTIR，NMR等)，這些方法具有很好的靈敏度及專屬性，但檢測過程復雜，需要昂貴的龐大的儀器，需要專業技術人員操作，耗時較長，不能實現對氯胺酮濫用者樣本的快速檢測。此外基于免疫競爭抑制法的膠體金法可以快速實現對尿液中氯胺酮的定性檢測，但其檢測靈敏度較低，檢測限為1000ng/mL，而氯胺酮在人體內含量原本較低，代謝迅速，易造成假陰性，且無法實現對樣本中氯胺酮濃度的定量測定。目前尚缺乏令人滿意的能快速高通量檢測樣品中氯胺酮含量的檢測方法，因此開發一種針對氯胺酮的方便快速，靈敏度高和特異性好的檢測方法是迫切需要解決的問題。

發明內容

發明目的：本發明目的是提供基于超分子熒光探針的靈敏度高，特異性好，方便快速，易于實現高通量的熒光檢測方法用于氯胺酮的檢測。

技術方案：本發明提供一種超分子熒光探針檢測氯胺酮的方法，包括如下步驟：

(1)超分子葫蘆脲[8]主體與原小檗堿型生物堿染料客體在緩沖液中自組裝得到超分子熒光探針，加入不同濃度的鹽酸氯胺酮，混勻，測定熒光強度，以氯胺酮濃度為橫坐標，引起的熒光猝滅強度為縱坐標，繪制標準曲線；

(2)取超分子熒光探針，添加相同體積處理后的含有氯胺酮的樣品，混勻，測定熒光信號值，根據熒光信號猝滅強度計算樣品中氯胺酮的濃度。

所述主體葫蘆脲[8]縮寫為CB[8]。其結構式如下：

所述的原小檗堿型生物堿染料客體包括巴馬汀、小檗堿和黃連堿；優選為巴馬汀。三種染料的結構式如下：

其中巴馬汀、小檗堿和黃連堿的縮寫分別為PAL、BER及COP。

進一步地，所述含有氯胺酮的樣品為尿液或血樣。繪制標準曲線后得到線性方程y＝7038x+180269，R²＝0.9963。所述原小檗堿型生物堿染料客體包括巴馬汀、小檗堿和黃連堿。超分子葫蘆脲[8]主體與原小檗堿型生物堿染料客體摩爾濃度比優選為1∶2。

進一步地，所述的氯胺酮樣品加入體積為350μL，熒光探針體積為350μL，渦旋2～3秒，加入96孔板，三個平行，每孔200μL。

進一步地，所述的熒光強度為激發波長為370nm，發射波長為540nm下的熒光信號值。

圖2為主客體不同比例摩爾濃度下的熒光強度(染料濃度為10μM)。如圖2所示，保持染料客體濃度不變，用CB[8]滴定染料客體，當主體CB[8]的摩爾濃度為染料客體的0.5倍時，熒光強度達到最高，繼續提高主體濃度，熒光強度保持不變，甚至反而降低。因此，CB[8]和原小檗堿型生物堿染料客體摩爾濃度比1∶2為超分子熒光探針自組裝的最佳比例。

本發明的檢測原理如圖1所示，超分子葫蘆脲與熒光染料客體結合后會消除熒光染料自身的聚集誘導猝滅效應，在最佳激發下發生熒光增強，而氯胺酮的加入，會將染料客體從葫蘆脲空腔中置換出來，染料客體在溶液中重新聚集，從而誘導熒光猝滅，加入氯胺酮的含量與熒光猝滅強度呈線性關系，從而實現檢測目的。本發明方法靈敏度高，特異性好，可用于實際生物樣本中氯胺酮的定量檢測。