[發明專利]一種用于蒽環類藥物用藥指導的多重基因檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202110316654.5
• 申請日: 2021-03-19
• 公開（公告）號: CN113512586A
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: 邱霓;黃慧琦;崔璐璐;李洪勝
• 申請（專利權）人: 廣州醫科大學附屬腫瘤醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11;C12Q1/6858
• 代理公司: 廣州瑞之凡知識產權代理事務所(普通合伙) 44514
• 代理人: 黃愛君

1.一種用于蒽環類藥物用藥指導的多重基因檢測試劑盒，其特征在于，包括PCR反應液、陽性對照品、超純水、純化液、熒光標記測序反應液、二次純化液以及以及定性檢測與蒽環類藥物代謝相關基因的若干個SNP位點PCR引物組合物。

2.根據權利要求1所述的一種用于蒽環類藥物用藥指導的多重基因檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR引物組合物包括定性檢測與蒽環類藥物代謝相關基因的八個SNP位點的引物組合物。

3.根據權利要求2所述的一種用于蒽環類藥物用藥指導的多重基因檢測試劑盒，其特征在于，所述SNP位點包括如下：AKR1A1 rs2088102和rs3014216，CBR1 rs20572和rs9024，ABCG2 rs2231142和rs2231137，SLC22A16 rs6907567和rs714368。

4.根據權利要求2所述的一種用于蒽環類藥物用藥指導的多重基因檢測試劑盒，其特征在于，所述八個SNP位點的引物組合物包括SEQ ID NO.1-A～SEQ ID NO.8-A以及SEQ IDNO.1-B～SEQ ID NO.8-B；如下表所示：

5.一種用于蒽環類藥物用藥指導的多重基因檢測方法，其特征在于，通過在蒽環類藥物攝入、代謝、排出的三個環節，利用Sanger測序法檢測蒽環類藥物代謝及轉運途徑的四個候選基因的八個SNP位點，從而為預測含蒽環類藥物化療致乳腺癌患者發生骨髓抑制的概率和程度，指導蒽環類藥物用藥提供依據；具體包括如下步驟：

S1：PCR產物獲取，以待測的基因組DNA為模板，通過聚合酶聯反應對若干個SNP位點進行PCR擴增；

S2：PCR產物純化，將10μL純化液加入上述PCR產物，然后將PCR管放置在PCR儀上，設定反應條件，37℃40min；85℃5min；4℃維持；

S3：熒光標記測序產物獲取，以步驟2中純化的PCR產物為模板，通過循環測序法對PCR產物中個堿基進行熒光標記；

S4：熒光標記測序產物純化，使用二次純化反應液對步驟3中的測序產物進行純化，然后使用基因分析儀進行檢測即可。

6.根據權利要求5所述的多重基因檢測檢測方法，其特征在于，所述S4中純化步驟如下：循環測序完成后，先對96孔的反應板進行短時離心，以1000g離心1min；然后向反應板的每一個微孔中加入55μL的二次純化反應液；再使用熱封或透明粘性蓋膜密封反應板；再將反應板固定在振蕩器上，以1000g振蕩20min；然后使用帶吊籃的離心機離心，以1000g離心2min；最后將反應板放入基因分析儀中，進行毛細管電泳檢測。

7.根據權利要求6所述的多重基因檢測方法，其特征在于，當S1、PCR產物獲取，以待測的基因組DNA為模板，通過聚合酶聯反應對8個SNP位點進行PCR擴增；所述PCR反應體系組成包括8μL的PCR反應液、1μL的基因組DNA以及1μL的SEQ ID NO.1-A～SEQ ID NO.8-A中任一一種。

8.根據權利要求7所述的多重基因檢測方法，其特征在于，所述循環測序反應體系組成包括：5μL的熒光標記測序反應液、4μL的PCR產物以及1μL的SEQ ID NO.1-B～SEQ ID NO.8-B中任一一種。