[發(fā)明專利]一種高密度脂蛋白3的測定試劑、方法和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011482221.9
• 申請日: 2020-12-16
• 公開（公告）號: CN112695071B
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王賢理;池萬余;王伊琳;苗準(zhǔn);鄧慰;盧強
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江伊利康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/60
• 分類號: C12Q1/60;C12Q1/30;C12Q1/28;C12Q1/26;C12Q1/44;G01N21/31
• 代理公司: 蘇州國誠專利代理有限公司 32293
• 代理人: 王麗

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域。目的是提供一種HDL3膽固醇的直接測定試劑、方法和試劑盒，即在第一試劑中添加除HDL3以外的脂蛋白保護(hù)劑；在第二試劑添加針對水解HDL3?C的表面活性劑與酶的組合的方法。技術(shù)方案是：一種測定HDL3的第一試劑，第一試劑包括除HDL3以外的脂蛋白保護(hù)劑，還包括Trinder’s色原化合物、二價金屬離子、膽固醇氧化酶、過氧化氫酶、緩沖液、穩(wěn)定劑、防腐劑；其中所述的除HDL3以外的脂蛋白保護(hù)劑，是指作用于除HDL3以外的化合物組合。眾所周知，血清樣本中的HDL3是最致密的脂蛋白，與特定的脂蛋白相關(guān)的表面活性劑、環(huán)糊精、抗體、聚陰離子、二價金屬離子等化合物的組合的反應(yīng)性極低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種高密度脂蛋白3(以下稱為HDL3)中膽固醇 (以下稱為HDL3-C)含量的測定試劑、方法和試劑盒。

背景技術(shù)

血液中存在的脂蛋白根據(jù)其比重大致分為高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、極低密度脂蛋白(VLDL)以及乳糜微粒(CM)。其中高密度脂蛋白(HDL)是由一系列大小、密度和化學(xué)組成各異的顆粒組成。一般將HDL亞組分中顆粒較小密度較大的HDL稱為高密度脂蛋白3(HDL3)，密度范圍為1.125～1.210g/mL；將顆粒較大、密度較小的HDL稱為高密度脂蛋白2(HDL2)，密度范圍為1.063～1.125g/mL。近來研究發(fā)現(xiàn)，HDL3在動脈硬化的惡化或恢復(fù)方面有重要作用。臨床實踐表面，膽固醇、HDL、LDL和甘油三酯的標(biāo)準(zhǔn)檢測通常只能檢出約20％的心血管疾病患者，其余約80％的患者只能通過區(qū)分亞組分和進(jìn)一步的脂類檢測來鑒別。進(jìn)一步研究證明HDL3與增加心肌梗死疾病風(fēng)險系數(shù)直接相關(guān)。

目前在臨床檢測應(yīng)用中，測定HDL3的方法有電泳法、超速離心法和分級沉淀法等。但這些方法檢測時間很長，操作步驟繁瑣，不能進(jìn)行大規(guī)模自動化檢測，且需要昂貴的儀器設(shè)備和專門的技術(shù)人員，故不能應(yīng)用于一般的臨床醫(yī)學(xué)檢測。

在全自動生化分析儀應(yīng)用領(lǐng)域，測定HDL3的方法有清除法、遮蔽法，其通過采用特征性的化合物清除或遮蔽非HDL3或全部脂蛋白與膽固醇脂酶的反應(yīng)，但清除法容易清除部分 HDL3，遮蔽法不能完全遮蔽膽固醇酯，從而使測定不準(zhǔn)確。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，針對目前缺乏專門針對HDL3的檢測方法的不足，提供一種HDL3膽固醇的直接測定試劑、方法和試劑盒，即在第一試劑中添加除HDL3以外的脂蛋白保護(hù)劑；在第二試劑添加針對水解HDL3-C的表面活性劑與酶的組合的方法。本發(fā)明所述的測定方法，能夠特定、專一地檢測HDL3，并且該測定方法可靠性高、成本低、效率高，能夠大規(guī)模自動化檢測，優(yōu)于遮蔽法。本發(fā)明所述的試劑盒操作簡便。

本發(fā)明通過廣泛深入的研究，發(fā)現(xiàn)將血清樣品與包括適宜濃度的表面活性劑，和除HDL3 以外的脂蛋白保護(hù)劑，和其他成分組成的第一試劑反應(yīng)，能夠較為完全地保護(hù)除HDL3以外的脂蛋白膽固醇；再與組分及其含量經(jīng)特殊選擇的第二試劑反應(yīng)，從而進(jìn)一步準(zhǔn)確測定血清標(biāo)本中HDL3的含量。

本發(fā)明的技術(shù)方案之一是提供一種測定HDL3的第一試劑，第一試劑包括除HDL3以外的脂蛋白保護(hù)劑，還包括Trinder’s色原化合物、二價金屬離子、膽固醇氧化酶、過氧化氫酶、緩沖液、穩(wěn)定劑、防腐劑；其中所述的除HDL3以外的脂蛋白保護(hù)劑，是指作用于除HDL3以外的化合物組合。眾所周知，血清樣本中的HDL3是最致密的脂蛋白，與特定的脂蛋白相關(guān)的表面活性劑、環(huán)糊精、抗體、聚陰離子、二價金屬離子等化合物的組合的反應(yīng)性極低。通過深入的選擇性研究，本發(fā)明中第一工序溶液包含這種組合；該組合與HDL3不反應(yīng)或反應(yīng)度極低。本發(fā)明中的這種組合，在血清樣本的脂蛋白測定中，無需進(jìn)行預(yù)先分離處理，即可進(jìn)行高密度脂蛋白3的分類測定。

本文中“保護(hù)”的含義，是指降低和分解或阻止和分解第一試劑中特定的脂蛋白膽固醇及其與膽固醇脂酶的反應(yīng)。

所述除HDL3以外的脂蛋白保護(hù)劑，包括非HDL3的表面活性劑、非HDL3的環(huán)糊精、非HDL3的聚陰離子、非HDL3的抗體；