[發明專利]一種納米化的冠狀病毒抗原及其應用

有效

• 申請號: 202110309707.0
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN113150084B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 方紅春;夏文娟;劉洪波;張維;張建軍;魏婷婷;張銀川;孫祖勇;趙志強
• 申請（專利權）人: 江蘇坤力生物制藥有限責任公司;北京志道生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/165
• 分類號: C07K14/165;C07K1/107;A61K39/385;A61K39/215;A61K39/39;A61P31/14
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;黃益澍

本發明公開了一種納米化的冠狀病毒抗原及其應用。所述納米化的冠狀病毒抗原為多糖共價偶聯2019?nCoV RBD蛋白后得到；所述2019?nCoV RBD蛋白包含：GenBank登錄號為MN908947.3的S蛋白的第319～541位氨基酸，或該段氨基酸序列的變體；所述變體與突變前序列具有至少70％的序列同源性，且至少保留突變前序列的抗原性。本發明的納米化偶聯RBD抗原克服了RBD單體免疫原性不足的缺點，大大提高了小鼠針對2019?nCoV的中和抗體滴度產生。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種納米化的冠狀病毒抗原及其應用，特別是基于聚合物偶聯的受體結合區納米化的新型冠狀病毒疫苗及其應用。

背景技術

新型冠狀病毒屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，是有囊膜的正鏈RNA病毒，在所有RNA病毒中其基因組最大，動物和人類都是冠狀病毒的宿主。其中有7種冠狀病毒感染人，包括對全球公共衛生威脅最大的是2002-2003年在中國爆發的嚴重呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)、2012年爆發并持續至今的中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)以及2019年爆發的新型冠狀病毒(2019-nCoV)。新型冠狀病毒于2020年1月12日被世界衛生組織正式命名。它是以前從未在人體中發現的冠狀病毒新毒株，該病毒為第七個可以感染人的冠狀病毒。人感染2019-nCoV的潛伏期一般為1～14天，感染后常見體征有呼吸道癥狀、發熱、咳嗽、氣促和呼吸困難等。在較嚴重病例中，感染可導致肺炎、嚴重急性呼吸綜合征、腎衰竭，甚至死亡。截止2020年12月30日，全球累計確證病例超過8千萬例，死亡人數超過170萬人。因此，開發一種安全、有效的針對新型冠狀病毒(2019-nCoV)的疫苗顯得十分緊迫、有著重要的意義。

表面刺突蛋白(S蛋白)是新型冠狀病毒的主要中和抗原。2019-nCoV通過受體結合區(Receptor Biniding Domain,RBD)區域與宿主細胞的受體血管緊張素轉換酶2(ACE2)結合而侵入細胞。因此，新型冠狀病毒S蛋白的受體結合區(RBD)被認為是誘導機體產生中和抗體的最主要的抗原靶區域。RBD蛋白作為疫苗抗原能夠將機體刺激產生的中和抗體更加聚焦在針對病毒的受體結合，可以提高疫苗的免疫原性和免疫效率。

新型冠狀病毒疫苗的靶抗原一般都是采用全長S蛋白和截短型S蛋白(S1和RBD)形式。關于新型冠狀病毒疫苗在研的種類包括腺病毒載體疫苗、mRNA疫苗、DNA疫苗、重組蛋白疫苗和滅活疫苗。本發明的目的就是提供一種新的疫苗形式且免疫原性增強，基于聚合物偶聯的受體結合區納米化的新型冠狀病毒疫苗。

此外，之前冠狀病毒疫苗的研究使用的是RBD單體，具有一定的中和免疫原性。但是，目前基于新型冠狀病毒S蛋白的RBD單體研制的疫苗，免疫原性有限。而基于RBD的融合蛋白(比如IgG的Fc段)則存在安全評價不足的缺陷。因此，開發一種免疫原性高、安全性更被認可的新型冠狀病毒疫苗，是目前亟需解決的問題。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是為克服現有技術中冠狀病毒疫苗的免疫原性有限的缺陷，提供一種納米化的冠狀病毒抗原及其應用。本發明的冠狀病毒抗原較RBD蛋白抗原自身，能顯著提高宿主中和抗體的水平，制備方法簡單、蛋白無純化標簽且易于純化，無生物安全風險，能較快、低成本的應用于臨床的使用。

本發明主要通過以下技術方案解決上述技術問題。

本發明的技術方案之一為：一種納米化的冠狀病毒抗原，其通過將多糖共價偶聯2019-nCoV RBD蛋白后得到；所述2019-nCoV RBD蛋白包含：

GenBank登錄號為MN908947.3的S蛋白的第319～541位氨基酸，或該段氨基酸序列的變體；所述變體與突變前序列具有至少70％的序列同源性，且至少保留突變前序列的抗原性。

例如，所述2019-nCoV RBD蛋白包含或者為GenBank登錄號為MN908947.3的S蛋白的第319～587位氨基酸。