[發明專利]一種構巢曲霉自誘導型表達系統及其應用在審
| 申請號： | 202110308872.4 | 申請日： | 2021-03-23 |
| 公開（公告）號： | CN113061538A | 公開（公告）日： | 2021-07-02 |
| 發明（設計）人： | 周哲敏;閆勤;韓來闖;崔文璟;程中一;劉中美;周麗;郭軍玲 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N1/15 | 分類號： | C12N1/15;C12N15/80;C12N9/08;C12N9/24;C12R1/66 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇鈺瑩 |
| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 曲霉 誘導 表達 系統 及其 應用 | ||
1.一種構巢曲霉自誘導表達系統，其特征在于，所述表達系統包括表達載體和宿主細胞；所述表達載體為過表達了鳥氨酸氨甲酰基轉移酶的pUC19質粒，所述表達載體還含有PniaD啟動子過表達目的基因，所述PniaD啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如權利要求1所述的構巢曲霉自誘導表達系統，其特征在于，所述鳥氨酸氨甲酰基轉移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.如權利要求1或2所述的構巢曲霉自誘導表達系統，其特征在于，所述宿主細胞為構巢曲霉ABPU1。
4.如權利要求1～3任一所述的構巢曲霉自誘導表達系統，其特征在于，所述目的基因包括但不限于：葡萄糖醛縮酶、過氧化氫酶、內切葡聚糖酶、纖維二糖水解酶。
5.如權利要求1～4任一所述的構巢曲霉自誘導表達系統，其特征在于，所述表達載體中的目的基因和鳥氨酸氨甲酰基轉移酶之間連接有終止子TtrpC。
6.一種采用構巢曲霉生產目標蛋白的方法，其特征在于，將連接了目標蛋白的權利要求1～5任一所述的構巢曲霉自誘導表達系統劃線至種子培養基中進行培養，制備得到種子液，將種子液添加至含有誘導劑的發酵培養基中，發酵生產目標蛋白。
7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述誘導劑為NH4+和或NO3-。
8.如權利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述發酵培養基中需同時添加尿苷、L吡哆醇及生物素。
9.如權利要求6～8任一所述的方法，其特征在于，所述種子液的制備方法為：將所述構巢曲霉自誘導表達系統劃線至種子培養基中進行培養，制備得到孢子，采用孢懸液清洗孢子，靜置，取上層游離孢子，制備得到種子液。
10.權利要求1～5任一所述的構巢曲霉自誘導表達系統，或權利要求6～9任一所述的方法在蛋白表達中的應用。
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