[發明專利]分子標志物SLC22A3的定量檢測方法和應用

有效

• 申請號: 202110308346.8
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN112899370B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 谷雨;錢軍;林江;馬吉春;聞向梅;徐子浚
• 申請（專利權）人: 鎮江市第一人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司 11421
• 代理人: 宋凌林

本發明涉及一種SLC22A3基因的檢測物在制備白血病輔助診斷、治療療效或者預后判斷試劑或藥物的應用，所述SLC22A3基因如SEQ ID NO.1所示，所述檢測物包括如SEQID NO.2所示的正向引物和如SEQ ID NO.3所示的反向引物。本發明用于檢測白血病的方法是基于基因標志物SLC22A3表達及甲基化的水平，與其他臨床指標相結合，為白血病的診斷、治療與預后提供更準確的判斷。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體涉及分子標記物的檢測方法及應用。

背景技術

急性髓細胞性白血病(AML)是起源于髓系祖細胞的一類造血系統惡性疾病，其發病涉及細胞分化、增殖、凋亡等多方面的異常改變，非隨機性染色體異常、癌基因和抑癌基因突變等在AML發生發展過程中起著重要作用。因AML異質性大，臨床上亟需標準化治療基礎上的基于患者生物學特性的個體化精準診療方案。近年來研究發現，涉及甲基化調控、組蛋白修飾、RNA剪切等的表觀遺傳學(epigenetics)改變是白血病發生過程中發揮重要作用的又一病理機制，且去甲基化藥物在AML治療中療效較好。研究表明，DNA甲基化與AML的發生、發展密切相關，可以作為有效的分子標志物應用于AML的輔助診斷、預后判斷和疾病監測，并為AML分子靶向治療提供更多可能。臨床上期待發現更多特異而敏感的DNA甲基化修飾，并將其運用于AML的臨床診療。

SLC22A3是溶質載體家族成員，編碼一種血漿整合膜蛋白，對于消除內源性有機小陽離子以及各種藥物和環境毒素至關重要。SLC22A3啟動子區域含有一個較大的CpG島，通過甲基化測序和數據庫分析發現SLC22A3在AML中發生高甲基化改變，提示SLC22A3可能在AML的發生、發展中起重要作用。目前尚無在AML中檢測SLC22A3基因表達和甲基化的方案，SLC22A3對白血病的意義也亟待發現。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提出基于定量PCR檢測人SLC22A3表達水平及啟動子甲基化水平的方法，以此作為急性髓系白血病患者的生物標志物，為臨床上急性髓系白血病患者的早期發現、治療療效及預后判斷提供支持。

為了實現發明目的，本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明第一方面提供一種SLC22A3基因的檢測物在制備白血病輔助診斷、治療療效或者預后判斷試劑或藥物的應用。

進一步地，所述SLC22A3基因如SEQ ID NO.1所示。

進一步地，所述檢測物包括如SEQ ID NO.2所示的正向引物和如SEQ ID NO.3所示的反向引物。

進一步地，所述檢測物還包括如SEQ ID NO.6-7和SEQ ID NO.8-9所示的SLC22A3甲基化和未甲基化特異性引物。

進一步地，所述試劑為定量PCR檢測試劑。

進一步地，所述白血病為急性髓系白血病。

本發明的第二方面提供一種白血病中檢測SLC22A3基因表達和甲基化的檢測物，包括檢測SLC22A3基因表達的一條正向引物和一條反向引物，檢測SLC22A3甲基化的一條上游引物和一條下游引物，以及檢測SLC22A3未甲基化的一條上游引物和一條下游引物，所述SLC22A3基因序列如SEQ ID NO.1所示，針對SLC22A3表達的引物序列如SEQ ID NO.2-3所示，針對SLC22A3甲基化的引物序列如SEQ ID NO.6-7所示，針對SLC22A3未甲基化的引物序列如SEQ ID NO.8-9所示。

進一步地，所述檢測物還包括內參ABL1引物和內參ALU引物，所述內參ABL1的正向引物如SEQ ID NO.4所示，反向引物如SEQ ID NO.5所示，所述內參ALU引物的正向引物如SEQ ID NO.10所示，反向引物如SEQ ID NO.11所示。

進一步地，所述白血病為急性髓系白血病。