[發明專利]一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202110307561.6
• 申請日: 2021-03-23
• 公開（公告）號: CN113075194A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 馮瑾瑾;李峰;薛永康;昌繼偉;張俊啟;張洋蒙
• 申請（專利權）人: 武漢康義盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N33/541
• 代理公司: 武漢紅觀專利代理事務所(普通合伙) 42247
• 代理人: 陳凱

1.一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒，其特征在于，包括單克隆或多克隆抗體組、拉曼活性物質標記的二抗、拉曼表面增強劑、磷酸緩沖液和抗原修復液。

2.如權利要求1所述的一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒，其特征在于，所述單克隆或多克隆抗體組為兔抗人CD3抗體、兔抗人CK20抗體、兔抗人p53抗體、NapsinA抗體、鼠抗人CEA抗體、MUC-4抗體、p16抗體、CK10抗體、CK14抗體、CK17抗體和Bax抗體中的兩種或多種組合，所述二抗為拉曼活性化合物標記的Polymer-酶標二抗。

3.如權利要求1所述的一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒，其特征在于，所述拉曼活性化合物為2,4-二硝基苯酚、氨基苯甲酸、赤蘚紅、生物素、地高辛、偶氮甲堿、花青、黃嘌呤、琥珀酰熒光素和氨基吖啶中的一種或多種組合。

4.如權利要求1所述的一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒，其特征在于，所述拉曼表面增強劑為金屬納米粒子和金屬氧化物納米粒子中的一種或多種組合。

5.如權利要求4所述的一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒，其特征在于，所述金屬納米粒子為銀納米粒子、金納米粒子、鉑納米粒子、鋰納米粒子或銅納米粒子中的一種或多種組合，粒徑為100-200nm。

6.如權利要求1所述的一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒，其特征在于，所述金屬氧化物納米粒子為氧化鈦納米粒子、氧化鐵納米粒子、氧化銀納米粒子、氧化鋰納米粒子、氧化銅納米粒子、氧化金納米粒子中的一種或多種組合。

7.如權利要求1所述的一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒，其特征在于，所述抗原修復液為EDTA緩沖液或檸檬酸鹽緩沖液。

8.如權利要求1所述的一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，烤片、脫蠟和復水：將組織切片置于60-65℃的烘箱中60min；將經過烤片后的組織切片置于二甲苯中浸洗2次，每次10分鐘，然后依次在無水乙醇、95％乙醇、85％乙醇中分別浸洗2次，每次5分鐘；

S2，抗原修復：用抗原修復液對上述經過烤片、脫蠟和復水后的腫瘤細胞切片進行95-100℃水浴加熱修復15-30min或2450MHZ/秒微波修復10-30min；

S3，一抗孵育：將腫瘤組織石蠟切片用內源性過氧化物酶阻斷10min后，用磷酸緩沖液清洗，滴加100μl單克隆抗體在石蠟切片上，在37℃條件下孵育50-90min，然后用磷酸緩沖液清洗3-4次；

S4，二抗標記：按照拉曼活性化合物∶二抗的體積比為(5-7)∶(8-10)的比例，將拉曼活性化合物加入到二抗溶液中，在37℃條件下進行化學配位耦合反應，得到標記有拉曼活性化合物的二抗；

S5，二抗偶聯：將拉曼表面增強劑分散于金屬化合物和磷酸緩沖液中，得到金屬納米粒子溶液；經過二抗標記后的腫瘤組織切片放入金屬納米粒子溶液，得到金屬-抗體復合物；

S6，二抗孵育：將經過一抗孵育的腫瘤細胞切片與100μl金屬-抗體復合物混合，在37℃條件下孵育30-40min，然后用磷酸緩沖液清洗2-3次；

S7，封片，檢測：載玻片用吹風機吹干，然后在載玻片上滴加中性樹膠，蓋上蓋玻片，待干片后放入拉曼光譜分析儀進行檢測。

9.如權利要求8所述的一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，步驟S5所述的金屬化合物為HAuCl₄、AgNO₃和CuCl₂中的一種。

10.如權利要求8所述的一種新型的拉曼光譜檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，步驟S7所述共焦拉曼光譜儀檢測，檢測范圍600-1800cm^-1，激發波長785mm，采樣時間1-100s，激發光功率為1-100mw。