[發(fā)明專利]一種甘露聚糖酶基因AbMan5、重組表達質粒、重組表達菌株、甘露聚糖酶及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110304884.X
• 申請日: 2021-03-22
• 公開（公告）號: CN113073107B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發(fā)明（設計）人: 韓正剛;楊江科;謝會芳;王丹;胡玉婷
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學;中國大洋礦產(chǎn)資源研究開發(fā)協(xié)會（中國大洋事務管理局）
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N9/24;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/00;C12P19/14;A23L29/00;A23K20/189;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產(chǎn)權代理事務所 44287
• 代理人: 謝閱

本發(fā)明公開一種甘露聚糖酶基因AbMan5、重組表達質粒、重組表達菌株、甘露聚糖酶及其應用，其中，所述甘露聚糖酶基因AbMan5用于編碼甘露聚糖酶，所述甘露聚糖酶基因AbMan5的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，編碼所得的甘露聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本發(fā)明提供的甘露聚糖酶基因AbMan5，由其編碼所得的甘露聚糖酶在高溫下具有高活性，且pH穩(wěn)定性良好，可用于動物飼料添加劑、食品添加劑以及甘露寡糖的制備。

技術領域

本發(fā)明涉及基因工程技術領域，具體涉及一種甘露聚糖酶基因AbMan5、重組表達質粒、重組表達菌株、甘露聚糖酶及其應用。

背景技術

利用甘露聚糖酶專一性地催化甘露糖的降解具有巨大的應用價值，然而，由于蛋白質序列的差異，來自不同微生物的甘露聚糖酶往往具有不同的酶學性質，例如，不同的反應溫度和pH，不一樣的溫度、酸堿度以及鹽度的耐受性，以及不同的產(chǎn)物類型(產(chǎn)物為不同長度的甘露寡糖)等，但是在高溫條件下具有高活性的甘露聚糖較為少見。

發(fā)明內容

本發(fā)明的主要目的是提出一種甘露聚糖酶基因AbMan5、重組表達質粒、重組表達菌株、甘露聚糖酶及其應用，旨在提供一種在高溫下具有高活性的甘露聚糖酶。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出一種甘露聚糖酶基因AbMan5，用于編碼甘露聚糖酶，所述甘露聚糖酶基因AbMan5的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本發(fā)明還提出一種甘露聚糖酶，所述甘露聚糖酶由如上所述的甘露聚糖酶基因AbMan5編碼所得，且所述甘露聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本發(fā)明還提出一種重組表達質粒，所述重組表達質粒包括如上所述的甘露聚糖酶基因AbMan5。

可選地，所述重組表達質粒還包括表達載體pET-28a。

本發(fā)明還提出一種如上所述的重組表達質粒的制備方法，包括以下步驟：

將甘露聚糖酶基因通過酶切位點EcoR I和Not I連接到載體pET-28a上，連接產(chǎn)物轉化到大腸桿菌DH5α中，用試劑盒提取質粒，獲得重組表達質粒pET-28a-AbMan5。

本發(fā)明還提出一種重組表達菌株，所述重組表達菌株包括如上所述的甘露聚糖酶基因AbMan5。

可選地，所述重組表達菌株的宿主細胞為大腸桿菌。

本發(fā)明還提出一種如上所述的重組表達菌株的制備方法，包括以下步驟：

將甘露聚糖酶基因AbMan5通過酶切位點EcoR I和Not I連接到載體pET-28a上，連接產(chǎn)物轉化到大腸桿菌DH5α中，用試劑盒提取質粒，獲得重組表達質粒pET-28a-AbMan5；

將重組表達質粒pET-28a-AbMan5采用CaCl₂法轉化大腸桿菌BL21(Rosetta)，得到含有質粒pET-28a-AbMan5的重組大腸桿菌BL21(Rosetta)，即為重組表達菌株。

本發(fā)明還提出一種如上所述得甘露聚糖酶的制備方法，包括如下步驟：

將甘露聚糖酶基因通過酶切位點EcoR I和Not I連接到載體pET-28a上，連接產(chǎn)物轉化到大腸桿菌DH5α中，用試劑盒提取質粒，獲得重組表達質粒pET-28a-AbMan5；

將重組表達質粒pET-28a-AbMan5采用CaCl₂法轉化大腸桿菌BL21(Rosetta)，得到含有質粒pET-28a-AbMan5的重組大腸桿菌BL21(Rosetta)；