[發明專利]制備彈性蛋白肽的方法、由其制備的彈性蛋白肽及其用途

在審

• 申請號: 202110304056.6
• 申請日: 2021-03-22
• 公開（公告）號: CN115109816A
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 王海燕;劉愛青;閆征;劉利格
• 申請（專利權）人: 安徽盛美諾生物技術有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/78;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/39;A61P3/06;A61P9/14;A23L33/18
• 代理公司: 北京華睿卓成知識產權代理事務所(普通合伙) 11436
• 代理人: 程淼

本發明提供一種制備能夠改善血管壁彈性的彈性蛋白肽的方法、由其制備的彈性蛋白肽及其用途。所述方法包括如下步驟：1)取動物的韌帶或動脈管為原料，在預處理后進行勻漿化得到總蛋白粗提物；2)將步驟1)得到的總蛋白粗提物先后以木瓜蛋白酶和膠原酶進行酶解，經離心后取沉淀，得到彈性蛋白粗提物；3)將步驟2)得到的彈性蛋白粗提物以彈性蛋白酶進行酶解，滅酶后進行離心并取上清液，得到彈性蛋白肽粗酶解物；4)將步驟3)得到的彈性蛋白肽粗酶解物進行過濾得到彈性蛋白肽，然后將該得到的彈性蛋白肽依次經離子交換樹脂層析和凝膠柱層析進行純化，得到能夠改善血管壁彈性的彈性蛋白肽。

技術領域

本發明涉及一種制備能夠改善血管壁彈性的彈性蛋白肽的方法、由其制備的彈性蛋白肽及其用途。

背景技術

心腦血管疾病以其高發病率、高致殘率、高死亡率和高復發率，極大地危害著人類的健康。隨著世界人口的老齡化，每年因心腦血管病死亡的人數占居首位。因此，對腦血管疾病的研究越來越受重視，而其中的主要環節之一就是研究心腦血管在生理或/和病理條件下的結構、功能特征及其增齡變化。研究發現，在心腦動脈瘤、心腦動脈粥樣硬化等多種心腦血管疾病中都伴有彈性蛋白的變化，提示彈性蛋白在心腦血管疾病過程中可能具有重要作用。

彈性蛋白(Elastin)是人體組織器官(如動脈、皮膚等)中重要的結構蛋白，是構成動脈壁的主要成分之一，以它為主(占90％)構成的彈性膜或彈性纖維，使動脈具有伸縮性，在正常壓力下支撐血管壁拮抗管壁塌陷，抵制因平滑肌收縮所致的血管閉合傾向。彈性蛋白還可以緩沖血流對管壁的沖擊力，在彈性動脈中將血流轉化為常流；完整的內彈性膜是防止能導致動脈粥樣硬化的大分子物質(如低密度脂蛋白)通過的屏障。此外彈性蛋白還具有調控平滑肌細胞增生和穩定動脈構筑的功能。隨著年齡增長，人體中的彈性蛋白降解，造成血管壁彈性降低。另一方面，彈性蛋白是一種既耐酸又耐堿的細胞外高分子基質蛋白，富含甘氨酸(33％)和脯氨酸(1％～13％)，極難溶于水，不易為人體吸收利用。

文獻“The role of elastin-derived peptides in human physiology anddiseases,Aurélie Le Page等,Matrix Biology，2019年11月，第84卷，第81～96頁”報道，由彈性蛋白降解制得的彈性蛋白肽能夠引發與全長彈性蛋白大致相同的細胞應答；該制得的彈性蛋白肽在組成上并非完全相同，但是已確定大部分為X-Gly-X-X-Pro-Gly生物活性序列。

相應地，為解決彈性蛋白難以吸收的問題，現有技術中已有制備成小分子彈性蛋白肽的教導。

例如，CN106381323A中公開了一種彈性蛋白肽及其制備方法、應用，所述方法以牛頸韌帶預處理后，與水混合、調節pH值，然后與蛋白酶混合后酶解，滅酶、離心、過濾收集濾液；然后將收集的濾液濃縮、干燥而制得彈性蛋白肽。

CN109680031A公開了一種彈性蛋白肽的提取方法，所述方法以魚軟骨為原料，經95％乙醇溶液和蒸餾水預處理后在緩沖液中進行超聲波處理，然后加入彈性蛋白酶進行酶解，滅酶后將酶解液抽濾，收集濾液進行幾次超濾，將所得超濾液進行透析除鹽、旋轉蒸發和冷凍干燥而得彈性蛋白肽。

CN108586603A公開了一種制備含多種特有氨基酸的彈性蛋白肽的方法，所述方法以牛筋為原料利用堿性蛋白酶進行水解，然后通過高溫滅酶、超濾濃縮、離子交換樹脂吸附、超聲波輔助親和反膠束提純，得到含多種特有氨基酸的彈性蛋白肽。

但是，現有技術中所制得的彈性蛋白肽均為用于改善皮膚彈性的目的，并不能起到改善血管壁彈性的作用。截至目前為止，尚未見改善血管壁彈性的彈性蛋白肽及其制備方法的相關報告。

發明內容

本發明是為解決上述現有技術的問題而作出的。本發明的一個目的是提供一種制備能夠改善血管壁彈性的彈性蛋白肽的方法、以及由其制備的彈性蛋白肽及其用途。根據本發明的方法制備的彈性蛋白肽能夠有效改善血管壁彈性、且還能有效降低血脂水平。