[發明專利]一種用于犬副流感LAMP檢測的引物、擴增反應液、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202110302377.2
• 申請日: 2021-03-22
• 公開（公告）號: CN112831610A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 王蓉蓉;馮小龍;孫云雷
• 申請（專利權）人: 愛若維生物科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州威世朋知識產權代理事務所(普通合伙) 32235
• 代理人: 楊林潔

本發明涉及一種用于犬副流感LAMP檢測的引物、擴增反應液、試劑盒及檢測方法，該試劑盒及檢測方法可以準確區分含有犬副流感病毒與不含犬副流感病毒的樣本，即進行LAMP特異性檢測后，表明設計引物的特異性良好。本申請的試劑盒及檢測方法能快速、準確的檢測出犬副流感病毒，通過目測或儀器觀察結果，數據處理簡單，成本低，對臨床檢測有重要意義，特別適合畜牧場使用，檢測實惠，可大量推廣。

技術領域

本發明涉及動物檢驗檢疫技術領域，尤其涉及一種用于犬副流感LAMP檢測的引物、擴增反應液、試劑盒及檢測方法。

背景技術

犬副流感(CPIV)是由副流感病毒Ⅱ型引起的，以急性呼吸道炎癥為主要癥狀的犬的病毒性傳染病。副流感病毒Ⅱ型為副黏病毒科、副黏病毒屬的成員，還可引起急性腦脊髓炎和腦內積水，臨床表現后軀麻痹和運動失調等癥狀。其病毒粒子表面含有血凝素和神經氨酸酶，可凝集人類O型、雞、豚鼠、大鼠、兔、犬、貓和羊的紅細胞。該病毒對理化因素的抵抗力不強，在無蛋白質的液體培養基中，室溫或4℃經2～4小時幾乎失去感染力，在pH值為3和37℃下活力也下降，對氯仿和乙醚敏感、季銨鹽類是有效的消毒劑。副流感病毒Ⅱ可感染各種年齡、性別和品種的犬，但幼齡、體弱和處于應激狀態的犬多發，且病情較重，病程1～4周不等，死亡率可達60％。常突然發生，傳播迅速，且常與近期發病犬或帶毒犬接觸有關。急性期病犬是最主要的傳染源。自然感染途徑主要是呼吸道。

CPIV突然發生時，病初發熱，體溫升高達40℃以上，單側或雙側鼻孔流出大量黏液性或不透明分泌物，嚴重的病犬有間歇性咳嗽，肺呼吸音粗厲。病犬精神不振，食欲減少，一般1周左右病情好轉。如有繼發感染，則病程延長，病情加重，咳嗽持久而不愈，甚至死亡。少數病犬可呈現出血性腸炎、后軀麻痹和運動失調等癥狀。可見鼻孔周圍有漿液性或黏液膿性鼻漏、結膜炎。剖檢可見扁桃體炎，氣管、支氣管炎，有時肺部有點狀出血。神經型主要表現為急性腦脊髓炎和腦內積水，整個中樞神經系統和脊髓均有病變，前葉灰質最為嚴重。

隨著國民生活水平的提高，寵物犬飼養量逐年上升，因此對犬和犬主人的健康保駕護航，加強犬副流感的檢測及防治非常重要。迄今，國際上用于犬副流感檢測的方法可以分為抗原檢測和抗體檢測兩大類。對抗原的檢測主要包括病毒的分離鑒定、RT-PCR、膠體金試紙條等。而針對抗體的檢測方法有免疫熒光法、ELISA、中和實驗和血凝抑制試驗等，但這些方法局限性很大，RT-PCR所需設備昂貴，操作繁瑣，膠體金試紙條敏感性和特異性弱，容易假陽結果出現，ELISA用于檢測抗體，檢測時間長且敏感性不強。因此，研究一種快速、特異、靈敏的恒溫擴增檢測方法，以應用到犬副流感病毒的診斷中是非常迫切的。

發明內容

本申請的目的是克服現有技術的缺陷，提供了一種用于犬副流感LAMP檢測的引物、擴增反應液、試劑盒及檢測方法。

為實現上述目的，本申請提供了一種用于犬副流感LAMP檢測的引物，包括兩條外引物F3-1和B3-1、兩條內引物FIP-1和BIP-1，以及一條環引物LB-1；所述的引物序列如下：

外引物F3-1的序列為：GGCATATGAGCGATTCACA；

外引物B3-1的序列為：AGCGATGAGAATCCCTTG；

內引物FIP-1的序列為：

CGGTTTTAGTGTTGTAGGTGGGACTCACTCAAGAACTGCAAGA；

內引物BIP-1的序列為：

ACTAACCTCTAATAACCCAGAGCTTGAGAACAATCCGTAGGC；

環引物LB-1的序列為：AGATCTCGGCTTCTTCTATTCT。

為實現上述目的，本申請還提供了一種用于犬副流感LAMP檢測的引物，包括兩條外引物F3-2和B3-2、兩條內引物FIP-2和BIP-2，以及一條環引物LB-2；所述的引物序列如下：