[發明專利]一種特異性識別小麥內源自噬相關蛋白8多克隆抗體的制備方法有效
| 申請號： | 202110301266.X | 申請日： | 2021-03-22 |
| 公開（公告）號： | CN113087788B | 公開（公告）日： | 2022-03-08 |
| 發明（設計）人： | 李永波;楚秀生;崔德周;樊慶琦;隋新霞;黃琛 | 申請（專利權）人： | 山東省農業科學院作物研究所 |
| 主分類號： | C07K16/06 | 分類號： | C07K16/06;C07K16/16 |
| 代理公司： | 濟南舜源專利事務所有限公司 37205 | 代理人： | 趙斌;苗峻 |
| 地址： | 250100 山東省濟南*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 特異性 識別 小麥 源自 相關 蛋白 克隆 抗體 制備 方法 | ||
1.一種特異性識別小麥內源自噬相關蛋白8多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所采用的抗原為人工合成多肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，編碼該多肽的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
2.根據權利要求1所述特異性識別小麥內源自噬相關蛋白8多克隆抗體的制備方法，其特征在于：具體步驟如下：
（1）將5 mg人工合成多肽偶聯到1 mg血藍蛋白KLH；
（2）飼養實驗級日本大耳白兔和新西蘭大白兔各1只，待兔子長至1-2kg時，用注射器將充分混勻的1mL完全弗氏佐劑和1mL濃度為0.7 mg/mL的步驟（1）偶聯后的多肽在每只兔子皮下注射第1針，標記為第1天；
（3）第12天，將充分混勻的1mL不完全弗氏佐劑和1mL濃度為0.35 mg/mL的步驟（1）偶聯后的多肽在兔子皮下注射第2針；
（4）第26天，將充分混勻的1mL不完全弗氏佐劑和1mL濃度為0.35mg/mL的步驟（1）偶聯后的多肽在兔子肌肉注射第3針；
（5）第40天，將充分混勻的1mL不完全弗氏佐劑和1mL濃度為0.35 mg/mL的步驟（1）偶聯后的多肽在兔子肌肉注射第4針；
（6）第54天，將充分混勻的1mL不完全弗氏佐劑和1mL濃度為0.35 mg/mL的步驟（1）偶聯后的多肽在兔子肌肉注射第5針；
（7）第66天，取兔子血清進行Western blot驗證。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（2）中所述的完全弗氏佐劑為液體石蠟：羊毛脂的體積比為2:1的組合物。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述的不完全弗氏佐劑為含有20mg/mL卡介苗的完全弗氏佐劑。
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