[發明專利]一種基于保護劑的精子冷凍保存方法

有效

• 申請號: 202110299450.5
• 申請日: 2021-03-22
• 公開（公告）號: CN113040132B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 高慧;李奎;秦啼;王爭光;董信陽
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 杜放

本發明公開了一種基于保護劑的精子冷凍保存方法，包括以下步驟：a)使用稀少精子冷凍保護劑稀釋精液樣本，所述的稀少精子冷凍保護劑與精液的體積比為1∶(1?2)；b)將精液?稀少精子冷凍保護劑混合物放置在室溫下作用最少5分鐘；c)將精液?稀少精子冷凍保護劑混合物裝入保存容器中扣在支架上，然后在液氮面上熏蒸10分鐘；d)將載有保存容器的支架轉移到?196℃液氮存儲罐中保存。其中，d)中所述的液氮存儲罐包括罐體、第一真空層、支撐腳、冷凍倉、安裝口、冷凍架、安全扣件、升降裝置、夾持裝置和兩軸坐標定位裝置；設置了冷凍架，可以保證有序的保存更多的冷凍試管；設置了兩軸坐標定位裝置，可以實現編碼存放和定位快速提取，提高了效率。

技術領域

本發明屬于輔助繁殖技術領域，尤其是涉及一種基于保護劑的精子冷凍保存方法。

背景技術

精液冷凍是一種輔助繁殖技術，常常用于養殖家畜中的人工授精或者人體的不孕不育輔助生殖；在精液冷凍的過程中，需要將人工收集的精液進行病毒抗性檢查和精子活力抽樣檢查，之后加入保護劑，并封存在冷凍試管中，在液氮的超低溫環境中進行冷凍保存；在需要時，將精液從液氮罐中取出進行解凍處理，即可進行受精使用；在現有的液氮冷凍裝置中，液氮裝置的結構較為簡單，通常是將由金屬制成的多層抽屜通過掛鉤掛在液氮罐的罐口，而金屬抽屜和存放其中的冷凍試管淹沒在液氮中，之后通過壓蓋將液氮罐封閉；此種液氮冷凍方式存在較大的弊端，首先，由于掛鉤掛在罐口，導致壓蓋在對液氮罐進行瓶口封閉時，密閉性較差，液氮會從罐口大量揮發，造成浪費，同時，由于液氮的泄漏，液氮罐口周圍的環境溫度大大降低，空氣中的水分會遇冷凝結，在液氮罐口形成厚厚的冰霜層，需要專門的工作人員進行定期的清理工作，投入的人力成本相應增加；其次，冷凍試管在金屬抽屜中的擺放完全依靠人力進行整理，沒有專門的定位機構，在進行幾次存放之后，金屬抽屜中的冷凍試管往往會失去排序，混亂的擺放在抽屜中，在進行解凍提取時需要工作人員花費較長的時間進行識別找尋，從而降低了效率，浪費了時間，造成液氮的揮發，同時，無法及時找到對應的冷凍試管，使得整個冷凍抽屜在外界環境中暴露的時間變長，大大增加了冷凍精液標本被感染的風險，同時，由于冷凍抽屜的集中存放，進一步增加了標本件病毒、細菌的傳染可能性，使得冷凍精子的存活率降低，繁殖率下降。

發明內容

本發明為了克服現有技術的不足，提供一種基于保護劑的精子冷凍保存方法。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：一種基于保護劑的精子冷凍保存方法，包括以下步驟:

a)使用稀少精子冷凍保護劑稀釋精液樣本，所述的稀少精子冷凍保護劑與精液的體積比為1∶(1-2)；

b)將精液-稀少精子冷凍保護劑混合物放置在室溫下作用最少5分鐘；

c)將精液-稀少精子冷凍保護劑混合物裝入保存試管中在液氮面上熏蒸10分鐘；

d)將載有保存試管的支架轉移到-196℃液氮存儲罐中保存；

其中，d)中所述的液氮存儲罐包括罐體、設于所述罐體壁的第一真空層、固定連接于所述管體底部的支撐腳、設于所述罐體內部的冷凍倉、設于所述罐體上部的安裝口、滑動連接于所述安裝口的冷凍架、設于所述冷凍架的安全扣件、設于所述冷凍架上的升降裝置、設于所述冷凍架上的夾持裝置和設于所述冷凍架上的兩軸坐標定位裝置；