[發明專利]一種甘肅山楂組培快繁的方法

在審

• 申請號: 202110296335.2
• 申請日: 2021-03-19
• 公開（公告）號: CN112841035A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 朱強;劉靜;曾繼娟;王婭麗;田英;白建國
• 申請（專利權）人: 寧夏林業研究院股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州市一新專利商標事務所有限公司 44220
• 代理人: 張芳

本發明涉及涉及藥用植物組織培養技術，尤其是一種甘肅山楂組培快繁的方法。其特點是，包括如下步驟：(1)選擇健康的甘肅山楂莖段，去掉葉片，剪成2～3cm的帶芽小段；(2)將得到的帶芽小段放在75％酒精溶液中滅菌30～60s，然后用滅菌蒸餾水清洗，再放在0.1％升汞溶液滅菌3～7min，最后用滅菌蒸餾水清洗。本發明的有益效果在于：(1)本發明通過探索適宜甘肅山楂的培養條件和培養基配方，實現了甘肅山楂穩定高效繁殖的目的，組培苗生產整齊一致，為工廠化育苗提供了有效的支持，具有廣泛的應用前景。經過試驗證明，本發明的方法得到增殖系數達到5?10，獲得的組培苗生根率在90％以上，移栽成活率在95％以上。

技術領域

本發明涉及涉及藥用植物組織培養技術，尤其是一種甘肅山楂組培快繁的方法。

背景技術

甘肅山楂(Crataegus kansuensis Wils)薔薇科山楂屬喬木，是中國特有的藥果兼用樹種。甘肅山楂夏季滿樹的白花，秋季果紅奪目，且觀賞期長，秋季樹葉黃色，是各旅游景點，公園的首選樹種。其果實為典型的藥食同源果品，具有強心、降血脂、降血壓、減肥、活血化瘀等功效，亦可鮮食、加工果醬、果丹皮、罐頭和飲料等，市場前景廣闊。

目前已公開的甘肅山楂繁育主要采用播種，扦插，嫁接等方式，播種繁殖存在局限性，嫁接繁育技術成活率較低，傳統的繁育方式已不能滿足對種苗的需要。而采用組培快繁的方法，不受時間和外界因素影響，可以在任意生長階段進行選材擴繁，對甘肅山楂工廠化育苗提供了便利的條件。本發明以甘肅山楂的莖段為外植體，經過誘導培養、增殖培養、生根培養、煉苗移栽等步驟建立了穩定的甘肅山楂組培快繁體系。目前我國對于甘肅山碴組織培養的研究尚無。

發明內容

本發明的目的是提供一種甘肅山楂組培快繁方法，能夠在短時間內提供健壯的甘肅山楂優質種苗，有效解決甘肅山楂的規模化育苗問題。

一種甘肅山楂組培快繁的方法，其特別之處在于，包括如下步驟：

(1)選擇健康的甘肅山楂莖段，去掉葉片，剪成2～3cm的帶芽小段；

(2)將得到的帶芽小段放在75％酒精溶液中滅菌30～60s，然后用滅菌蒸餾水清洗，再放在0.1％升汞溶液滅菌3～7min，最后用滅菌蒸餾水清洗；

(3)將得到的帶芽小段進行芽誘導培養，使用的芽誘導培養基為MS+6-BA 0.5～1.0mg/L+NAA 0.2～0.4mg/L+蔗糖30～40g/L+瓊脂6.5～7.5mg/L；

(4)然后進行芽增殖培養，使用的繼代增殖培養基為MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IBA0.1～0.4mg/L+IAA 0.6～1.2mg/L+水解酪蛋白100～150ml/L+蔗糖30～40g/L+瓊脂6.5～7.5mg/L；

(5)最后進行生根培養，將得到的不定芽轉接至生根培養基中，使用的生根培養基為1/2MS+IBA 0.5～0.2mg/L+KT 0.05～0.1mg/L+活性炭0.5～1.0g/L+蔗糖15～20g/L+瓊脂6mg/L。

步驟(1)中首先對健康的甘肅山楂莖段用流水初步清洗，然后將清洗后的健康的甘肅山楂莖段剪成2～3cm的帶芽小段置于自來水下，流水沖洗2～3h，取溫水加入2～3滴吐溫-80，用刷子蘸取加入吐溫的溫水刷洗外植體，最后流水沖洗2～3次至無吐溫殘留。

步驟(2)中根據外植體2～3cm的帶芽莖段木質化程度，采用不同滅菌時間，具體是對于頂芽部位依次用75％酒精滅菌30s，無菌水漂洗3次，0.1％的升汞溶液滅菌3min，無菌水漂洗4次；對于半木質化部位，依次用75％酒精滅菌60s，無菌水漂洗3次，0.1％的升汞溶液滅菌5min，無菌水漂洗4次。

步驟(3)中芽誘導培養為MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.5mg/L。