[發明專利]基于拉曼光譜的多藥耐藥腫瘤細胞鑒定方法

有效

• 申請號: 202110296137.6
• 申請日: 2021-03-19
• 公開（公告）號: CN113075192B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 殷建;尹煥才;張志強;陳名利
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所;濟南國科醫工科技發展有限公司
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 張川

1.一種基于拉曼光譜的多藥耐藥腫瘤細胞鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備拉曼增強基底；

2)在步驟1)得到的拉曼增強基底上偶聯可與多藥耐藥腫瘤細胞特異性結合的藥物；

3)針對多種類型的腫瘤細胞分別按如下方法獲取對應的多藥耐藥腫瘤細胞的拉曼光譜的特征指示峰，從而構建多種多藥耐藥腫瘤細胞的拉曼光譜的特征指示峰數據庫：

將同一種類腫瘤細胞的多藥耐藥腫瘤細胞和正常腫瘤細胞分別與步驟2)得到的拉曼增強基底共同孵育，然后對與兩種腫瘤細胞分別供孵育后的兩個拉曼增強基底進行拉曼檢測，從而獲得多藥耐藥腫瘤細胞對應的拉曼光譜R1和正常腫瘤細胞對應的拉曼光譜R2，將R1和R2進行比較，獲得至少一個在R1中存在而R2中不存在的區別峰，然后從所有區別峰中至少選擇一個作為用于指示存在多藥耐藥腫瘤細胞的特征指示峰T；

4)待測腫瘤細胞的鑒定：將待檢測的腫瘤細胞與步驟2)得到的拉曼增強基底共同孵育，取出拉曼增強基底后進行拉曼檢測，得到待檢測的腫瘤細胞的拉曼光譜Rx，根據待檢測的腫瘤細胞的種類，在步驟2)獲得的拉曼光譜的特征指示峰數據庫中獲取相同種類的腫瘤細胞所對應的多藥耐藥腫瘤細胞的所有特征指示峰數據Tn，在Rx中查找出現的包含于Tn中的特征指示峰的數量，記為X；若X≥A*N，則判定待檢測的腫瘤細胞為多藥耐藥腫瘤細胞，否則為正常腫瘤細胞，其中，N表示Tn中的所有特征指示峰的數量，A為修正系數，0＜A≤1；

所述步驟2)具體包括：先制備表面采用巰基乙酸修飾，并偶聯有藥物的金納米粒子溶液；然后將金納米粒子溶液離心，洗滌后重懸在超純水中，得到金納米粒子分散液；然后將步驟1)制得的拉曼增強基底浸入該金納米粒子分散液中，反應過夜后取出拉曼增強基底，超純水清洗后用氮氣干燥；

所述步驟3)中，先將同一種類腫瘤細胞的多藥耐藥腫瘤細胞和正常腫瘤細胞分別與金納米溶液混合，得到的兩混合液再分別與步驟2)得到的拉曼增強基底共同孵育；

所述步驟4)中，先將待檢測的腫瘤細胞與金納米溶液混合，得到的混合液再與步驟2)得到的拉曼增強基底共同孵育。

2.根據權利要求1所述的基于拉曼光譜的多藥耐藥腫瘤細胞鑒定方法，其特征在于，所述藥物可與多藥耐藥腫瘤細胞上的Mdr1蛋白特異性結合。

3.根據權利要求2所述的基于拉曼光譜的多藥耐藥腫瘤細胞鑒定方法，其特征在于，所述藥物為維拉帕米、環孢素、阿霉素、長春新堿中的一種或多種。

4.根據權利要求1所述的基于拉曼光譜的多藥耐藥腫瘤細胞鑒定方法，其特征在于，所述步驟1)具體包括：以光刻膠為掩膜，用HF酸在載玻片上腐蝕出若干深度與寬度均為10μm的微孔；將具有微孔的載玻片于食人魚溶液中浸泡，之后取出載玻片用超純水洗滌并用氮氣干燥；將載玻片完全浸潤在含有3-氨丙基三乙氧基硅烷的乙醇溶液中，然后取出載玻片并用純乙醇洗滌，氮氣干燥，制得拉曼增強基底。

5.根據權利要求1所述的基于拉曼光譜的多藥耐藥腫瘤細胞鑒定方法，其特征在于，金納米粒子溶液中，金納米粒子的直徑10nm。

6.根據權利要求1所述的基于拉曼光譜的多藥耐藥腫瘤細胞鑒定方法，其特征在于，所述步驟3)和步驟4)中進行拉曼檢測的參數為：激光波長為785nm，最大激發功率為14mW。