[發明專利]鑒別布魯氏菌疫苗株A19與野毒株的引物、探針及應用在審
| 申請號： | 202110295989.3 | 申請日： | 2021-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN113025734A | 公開（公告）日： | 2021-06-25 |
| 發明（設計）人： | 張春紅;劉志成;沈海燕;馬祥;孫俊穎;張建峰;廖明 | 申請（專利權）人： | 廣東省農業科學院動物衛生研究所;嶺南現代農業科學與技術廣東省實驗室茂名分中心 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京盛詢知識產權代理有限公司 11901 | 代理人： | 陳巍 |
| 地址： | 510640 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鑒別 布魯氏菌 疫苗 a19 野毒株 引物 探針 應用 | ||
1.一種鑒別布魯氏菌疫苗株A19與野毒株的引物和探針，其特征在于，所述引物包括如SEQ ID NO：1所示的上游引物和如SEQ ID NO：2所示的下游引物；所述探針的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
2.如權利要求1所述的鑒別布魯氏菌疫苗株A19與野毒株的引物和探針，其特征在于，所述探針核苷酸序列的5'端連接熒光基團、3'端連接淬滅基團，所述熒光基團選自FAM、HEX、VIC、CY5、TET中的任意一種；所述淬滅基團選自BHQ系列和TAMRA系列中的任意一種。
3.一種試劑盒，其特征在于，包括權利要求1或2所述的引物和探針。
4.一種權利要求1或2所述的引物和探針、或權利要求3所述的試劑盒在快速區分布魯氏桿菌A19疫苗株與野毒株中的應用。
5.一種鑒別布魯氏菌疫苗株A19與野毒株的方法，其特征在于，包括利用權利要求1所述的引物和探針擴增樣品DNA模板獲取擴增產物，以及對所述擴增產物進行熔解曲線分析確定樣品病毒類型的步驟。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，擴增體系包括以下組分：Luna UniversalProbe qPCR Master Mix 5.0μL，上游引物0.8μL，下游引物0.4μL，探針0.4μL，模板1.0μL以及ddH2O 2.4μL。
7.如權利要求5所述的方法，其特征在于，擴增反應條件：95℃預變性1min；95℃變性15s，60℃退火30s；循環55次。
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