[發明專利]一種檢測肌苷酸的酶生物傳感器、其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110294131.5
• 申請日: 2021-03-19
• 公開（公告）號: CN113030217A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 郭業民;王廣現;孫霞;項耀東;方洪剛
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/49
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.檢測肌苷酸的自組裝ZIF-67@AgNPs-魯米諾雙酶電化學發光傳感器，其特征在于，其線性檢測范圍為0.001~25 g/L，由參比電極、對電極和修飾電極組成，將AgNPs固定在MOF材料ZIF-67上，采用十二面體結構分散AgNPs粒子，防止納米AgNPs粒子團聚，同時利用ZIF-67超大的比表面積和生物相容性，固定化兩種水解酶(5'-核苷酸酶和黃嘌呤氧化酶)對IMP進行水解，通過兩步酶解反應得到的H₂O₂顯著放大了魯米諾-H₂O₂體系的ECL信號，ZIF-67和AgNPs兩種催化材料的結合，雙酶兩步水解法的應用使ECL信號更明顯，檢出限更高。

2.如權利要求1所述的檢測肌苷酸的雙酶傳感器，其特征在于，所述5'-核苷酸酶溶液由5'-核苷酸酶溶于pH 7.4、0.01M的PBS溶液得到；所述黃嘌呤氧化酶溶液由黃嘌呤氧化酶溶于pH 7.4、0.01M的PBS溶液得到。

3.如權利要求1所述的檢測肌苷酸的雙酶傳感器，其特征在于，所述ZIF-67制備方法：將用分析天平稱取249.0 mg Co(NO₃)₂·6H₂O和996.0 mg 2-甲基咪唑，然后溶解在25.0 mL甲醇中，然后將2-甲基咪唑溶液倒入Co(NO₃)₂·6H₂O溶液中制備ZIF-67前驅體溶液，室溫靜置24小時，最后，用離心機對混合溶液進行離心，得到紫色沉淀，將沉淀用甲醇洗滌多次，80℃真空干燥，得到紫色的ZIF-67樣品：

AgNPs制備方法：使用硼氫化鈉還原硝酸銀制備納米銀，準備100毫升0.01M硝酸銀溶液和100毫升0.01M檸檬酸鈉溶液，混合，加入470毫升超純水，同時快速攪拌，添加60毫升0.01M NaBH₄于混合溶液中，攪拌30分鐘，使用前在4℃冰箱老化2天，將得到的溶液離心，用超純水洗滌沉淀多次，真空干燥得到納米銀粉末；

ZIF-67@AgNPs-魯米諾混合溶液的制備方法為：取20 mg ZIF-67粉末，懸浮于9.5 ml超純水中，加入AgNPs粉5 mg，魯米諾粉5 mg，攪拌后加入ZIF-67，將溶液的pH調至7.4后，攪拌30分鐘。

4.如權利要求1所述的檢測肌苷酸的雙酶傳感器，其特征在于，所述工作電極為鉑電極，所述參比電極為Ag/AgCl電極，所述對電極為鉑電極。

5.如權利要求1所述的檢測肌苷酸的雙酶傳感器，其特征在于，所述雙酶電化學發光傳感器為0.0013g/L。

6.權利要求1~5任一項所述雙酶傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）對工作電極進行表面預處理；

（2）將所述復合溶液a滴加到步驟（1）表面預處理后的工作電極表面，室溫晾干；

（3）將雙酶復合溶液b混合物滴加到步驟（2）處理后的電極表面，室溫晾干；

（4）將所述牛血清白蛋白溶液滴加到步驟（3）處理后的電極表面，室溫晾干，得到修飾電極；

（5）將步驟（4）所得修飾電極與所述參比電極和所述對電極組成三電極體系，即得；其中：所述復合溶液a、雙酶復合溶液b和牛血清白蛋白溶液的滴加量體積比為1:1:1。

7.如權利要求6所述雙酶電化學發光傳感器的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述工作電極表面預處理的步驟為：將工作電極依次使用0.3 μm和0.05 μm的氧化鋁粉末在拋光布上拋光成鏡面，再用超純水沖洗，然后在超純水中超聲處理1min，然后置于鐵氰化鉀溶液中活化處理，取出，用超純水沖洗，氮氣吹干；其中，所述鐵氰化鉀溶液為由K₃[Fe(CN)₆]、K₄[Fe(CN)₆]和KCl按摩爾比為1:1:100組成的混合溶液。