[發明專利]金屬蛋白酶ADAMTS13活性定量檢測試劑盒及其使用方法在審
| 申請號： | 202110293606.9 | 申請日： | 2021-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN113514640A | 公開（公告）日： | 2021-10-19 |
| 發明（設計）人： | 晏妮 | 申請（專利權）人： | 晏妮 |
| 主分類號： | G01N33/573 | 分類號： | G01N33/573;G01N33/58 |
| 代理公司： | 紹興市寅越專利代理事務所(普通合伙) 33285 | 代理人： | 陳彩霞 |
| 地址： | 312000 浙江省紹興市洪*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 金屬 蛋白酶 adamts13 活性 定量 檢測 試劑盒 及其 使用方法 | ||
1.金屬蛋白酶ADAMTS13活性定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒內包括有底物GST-vWF73、酶切反應緩沖液、ELISA反應結合孔板、結合GST-vWF73的一抗、偶聯HRP酶二抗、TMB底物、反應終止液和洗脫緩沖液。
2.根據權利要求1所述的金屬蛋白酶ADAMTS13活性定量檢測試劑盒，其特征在于，所述底物GST-vWF73的肽鏈的末端修飾有組氨酸標簽。
3.根據權利要求2所述的金屬蛋白酶ADAMTS13活性定量檢測試劑盒，其特征在于，所述底物GST-vWF73為GST-vWF73-6His。
4.根據權利要求1所述的金屬蛋白酶ADAMTS13活性定量檢測試劑盒，其特征在于，所述ELISA反應結合孔板為96孔板。
5.根據權利要求1所述的金屬蛋白酶ADAMTS13活性定量檢測試劑盒，其特征在于，所述金屬蛋白酶ADAMTS13為人源。
6.如權利要求1-5任一項所述的金屬蛋白酶ADAMTS13活性定量檢測試劑盒的使用方法，包括以下步驟：
S1實驗準備，除試劑盒外，準備一套標準品、兩個質控、純凈水、移液器、搖床、ELISA平板封膜、ELISA平板閱讀器、實驗室用計時器；
S2根據需要，取出一定數量的ELISA反應結合孔板，置于室溫待用；
S3在反應孔中加入稀釋過的GST底物，在空白孔中加入反應緩沖液作為空白對照；
S4分別取血漿標準品，2個質控，以及待測血漿樣本，加入對應的反應孔，另外在空白孔中加入10uL反應緩沖液作為0％；
S5蓋上平板封膜，置于搖床反應；
S6從試劑盒中取出洗脫緩沖液，加純凈水中混合均勻，制備成工作洗脫緩沖液，置于室溫中待用；
S7將搖床中的平板取出，倒掉反應混合物，用洗脫緩沖液洗4次，最后一次洗完以后，將平板在吸水紙上輕叩，去掉多余的水分；
S8加入一抗，蓋上平板封膜，置于搖床反應；
S9重復S7一次；
S10加入二抗，蓋上平板封膜，置于搖床反應；
S11重復S7一次；
S12加入TMB底物，室溫反應；
S13建立縱坐標是血漿濃度(％)的常用對數(Log10)，橫坐標是OD450的標準曲線。
7.根據權利要求6所述的金屬蛋白酶ADAMTS13活性定量檢測試劑盒的使用方法，所述步驟S4中的待測血漿樣本為枸櫞酸鈉抗凝血漿。
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