[發(fā)明專利]人外周血T淋巴細(xì)胞的處理方法及免疫原制劑和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110293348.4
• 申請(qǐng)日: 2021-03-18
• 公開（公告）號(hào): CN113025571B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒浩勇;張智;薛紅剛;殷文曲;王智;程文靜;黃夢(mèng);張頌;鄧龍興;余健;洪紫蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢中生毓晉生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783;C07K16/06;C07K16/18
• 代理公司: 武漢藍(lán)寶石專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 謝洋

1.一種人外周血T淋巴細(xì)胞處理方法，其特征在于，包括如下步驟：

收集白細(xì)胞濾盤中的白細(xì)胞，采用淋巴細(xì)胞分離液處理所述白細(xì)胞，離心后吸取白膜層，采用PBS緩沖液進(jìn)行重懸，離心重復(fù)洗滌，獲得分離純化的單個(gè)核細(xì)胞；

收集經(jīng)活性鑒定合格的單個(gè)核細(xì)胞，進(jìn)行批量?jī)龃妫?/p>

將所述經(jīng)活性鑒定合格的單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行增殖培養(yǎng)，所述增殖培養(yǎng)采用含CD3單抗、IL-2、IGF-1以及Human serum albumin（HSA）的RPMI1640 nonessential amino acids培養(yǎng)基，獲得活性大于90%且不摻雜紅細(xì)胞和血小板的T淋巴細(xì)胞。

2.一種T淋巴細(xì)胞免疫原制劑，其特征在于，為主要由礦物油佐劑、分子佐劑和按照權(quán)利要求1的處理方法制備獲得的T淋巴細(xì)胞混合制備而成的水包油抗原制劑。

3.權(quán)利要求2所述的T淋巴細(xì)胞免疫原制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

將權(quán)利要求1制備獲得的T淋巴細(xì)胞作為抗原，無(wú)菌條件下將抗原和礦物油佐劑按照質(zhì)量比1:1混勻，再加入分子佐劑，震蕩形成水包油抗原制劑。

4.一種經(jīng)權(quán)利要求1所述的人外周血T淋巴細(xì)胞處理方法獲得的高活性T淋巴細(xì)胞或者權(quán)利要求2所述的T淋巴細(xì)胞免疫原制劑在生產(chǎn)抗人T細(xì)胞免疫蛋白中的應(yīng)用。

5.一種含抗人T細(xì)胞免疫蛋白的抗血清的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟：

采用權(quán)利要求2所述的T淋巴細(xì)胞免疫原制劑頸側(cè)肌注免疫健康豬，免疫程序?yàn)?次基礎(chǔ)免疫和2次加強(qiáng)免疫，免疫時(shí)間間隔為21~28天，于第2次加強(qiáng)免疫后的第9~14天收集含抗人T細(xì)胞免疫蛋白的抗血漿。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的含抗人T細(xì)胞免疫蛋白的抗血清的生產(chǎn)方法，其特征在于，還包括對(duì)所述抗血漿進(jìn)行抗體效價(jià)分析的步驟。

7.一種抗人淋巴細(xì)胞免疫蛋白的生產(chǎn)方法，其特征在于，以白細(xì)胞濾盤收集的白細(xì)胞為原料，利用權(quán)利要求5的生產(chǎn)方法獲得的抗血清，分離，純化，獲得抗人淋巴細(xì)胞免疫蛋白。