[發明專利]顯現單個細胞中的修飾的核苷酸和核酸相互作用

在審

• 申請號: 202110293255.1
• 申請日: 2015-12-22
• 公開（公告）號: CN113151407A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: V·帕爾漢;C·克里德
• 申請（專利權）人: 西格馬－奧爾德里奇有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/6841
• 分類號: C12Q1/6841
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 彭昶

1.用于顯現細胞中的兩個核酸序列之間的相互作用的方法，所述方法包括：

a）使制備的細胞與第一核酸探針和第二核酸探針接觸，所述第一核酸探針包含第一標記物且與第一核酸序列具有互補性，所述第二核酸探針包含第二標記物且與第二核酸序列具有互補性，其中所述第一和第二標記物是不同的，并且所述第一和第二核酸探針分別與所述第一和第二核酸序列雜交；

b）使來自步驟a)的細胞與結合所述第一標記物的第一結合劑和結合所述第二標記物的第二結合劑接觸；

c）通過鄰近連接測定法檢測所述第一和第二結合劑以顯現所述細胞中的兩個核酸序列之間的相互作用。

2.權利要求1的方法，其中所述制備的細胞是固定的，透化的，并且任選地包含變性的染色體DNA。

3.權利要求1或2的方法，其中所述第一和第二核酸序列各自選自啟動子DNA、增強子DNA、CpG島DNA、編碼DNA、內含子DNA、信使RNA、微小RNA、非編碼RNA、長非編碼RNA、核糖體RNA、轉移RNA、小核RNA、小核仁RNA、SmY RNA、Y RNA、剪接的前導RNA、端粒酶RNA組分、小干擾RNA、Piwi-相互作用RNA或反式作用RNA。

4.權利要求1至3中任一項的方法，其中所述第一和第二標記物各自選自生物素、洋地黃毒苷、二硝基苯基、熒光素、二乙基氨基香豆素、羅丹明、花青3、花青5或德克薩斯紅。

5.權利要求1至4中任一項的方法，其中所述第一和第二核酸探針各自是線性或環狀的，包含DNA、RNA、LNA或其組合，并且具有約15個核苷酸至約500個核苷酸的長度。

6.權利要求1至5中任一項的方法，其中所述細胞是選自真核細胞、哺乳動物細胞、人細胞、正常細胞或癌細胞的個體細胞，或者所述細胞在獲得自真核生物的組織樣品或流體樣品內。

7.用于顯現細胞中特異性核酸序列中的修飾的核苷酸的方法，所述方法包括：

a）使制備的細胞與至少一種核酸探針接觸，所述至少一種核酸探針用至少一種標記物標記且與所述特異性核酸序列互補，其中所述核酸探針與所述特異性核酸序列雜交以形成雜交細胞；

b）使所述雜交細胞與結合所述核酸探針的標記物的第一結合劑和結合所述修飾的核苷酸的第二結合劑接觸；

c）通過鄰近連接測定法檢測所述第一和第二結合劑以顯現細胞中的特異性核酸序列中的修飾的核苷酸。