[發明專利]丹參酮ⅡA合酶基因及應用

有效

• 申請號: 202110291299.0
• 申請日: 2021-03-18
• 公開（公告）號: CN113005130B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 楊蕾;陳曉亞;許晶晶;李辰意;宋嬌嬌;范航
• 申請（專利權）人: 上海辰山植物園
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/04;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/04;C12N15/84;A01H5/06;A01H6/50;C12R1/19
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 歐陽石文

1.丹參酮ⅡA合酶的基因TⅡAS，其核苷酸序列如下之一：

1）SEQ ID No.1、SEQ ID No.3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7所示的核苷酸序列；

2）核苷酸序列一致性與SEQ ID No.1達到99%以上的來源于丹參同源基因，且編碼的蛋白質仍具有丹參酮ⅡA合酶的活性。

2. 根據權利要求1所述的基因TⅡAS，其特征在于：所述的丹參酮ⅡA合酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7所示。

3.一種由權利要求1或2所述的基因TⅡAS編碼的蛋白質。

4.根據權利要求3所述的蛋白質，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID No.2、SEQ IDNo.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8所示。

5.含有權利要求1或2所述的基因TⅡAS的重組載體。

6.如權利要求5所述的重組載體，其特征在于，是表達載體。

7.如權利要求6所述的重組載體，其特征在于，是細菌、真菌或植物表達載體。

8.含有權利要求1或2所述的基因TⅡAS或如權利要求5所述重組載體的宿主細胞，所述細胞是細菌或真菌。

9.如權利要求8所述的細胞，其特征在于，為大腸桿菌或酵母細胞。

10.含有權利要求1或2所述的基因TⅡAS或如權利要求3或4所述的蛋白質在生產或制備丹參酮ⅡA或異丹參酮ⅡA中的應用。

11.利用微生物發酵催化隱丹參酮生成丹參酮ⅡA，或催化異隱丹參酮生成異丹參酮ⅡA的生產方法，其特征在于，所述微生物中導入并表達如權利要求1或2所述的基因TⅡAS；培養含有表達所述基因TⅡAS的微生物，從微生物菌體中提取丹參酮ⅡA或異丹參酮ⅡA，其中培養基中添加隱丹參酮或異隱丹參酮。

12.如權利要求11所述的生產方法，其特征在于，所述微生物是大腸桿菌或酵母。

13.一種提高丹參的丹參酮ⅡA含量的方法，其特征在于，將如權利要求1或2所述的基因TⅡAS導入目標丹參中，以獲得過表達所述基因TⅡAS的轉基因植株。

14.如權利要求13所述的方法，其特征在于，利用所構建的含有所述基因TⅡAS的農桿菌或根癌農桿菌菌株轉化丹參，獲得過表達所述基因TⅡAS的轉基因丹參植株或發根，其中丹參酮ⅡA的含量得到提高。

15.利用如權利要求3或4所述的蛋白質在體外生產或制備丹參酮ⅡA或異丹參酮ⅡA中的方法，其特征在于，采用如權利要求3或4所述的蛋白質催化隱丹參酮生成丹參酮ⅡA，或催化異隱丹參酮生成異丹參酮ⅡA，且反應體系中含有α-酮戊二酸。

16.如權利要求15所述的方法，其特征在于，反應體系中還含有Fe²⁺和/或抗壞血酸。

17.如權利要求15所述的方法，其特征在于，權利要求3或4所述的蛋白質通過基因工程菌發酵后提取得到的。