[發明專利]一種牛支原體性小鼠乳腺炎模型的構建方法及其應用

有效

• 申請號: 202110290013.7
• 申請日: 2021-03-18
• 公開（公告）號: CN113040094B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 韓博;劉洋;高健;王登峰;石玉祥
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61K49/00;A61K31/198;A61P15/14;A61P31/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

本發明公開了一種牛支原體性小鼠乳腺炎模型的構建方法及其應用。本發明提供了一種小鼠乳腺炎模型的構建方法，包括如下步驟：將感染液接種至泌乳期小鼠的乳腺；所述感染液是用無菌緩沖溶液懸浮牛支原體NMH7株得到的。具體的，接種方式可為通過小鼠乳導管接種。具體的，小鼠的乳腺為小鼠的第四對乳腺。本發明還保護N?acetyl?L?cysteine在制備牛支原體奶牛乳房炎藥物中的應用。本發明構建的模型，能夠模擬臨床上牛支原體奶牛乳房炎發生時，奶牛乳腺發生的病理變化，具有良好的可重復性和便捷性，具有良好的實際應用價值。

技術領域

本發明屬于動物模型構建技術領域，具體涉及一種牛支原體性小鼠乳腺炎模型的構建方法及其應用。

背景技術

牛支原體(Mycoplasma bovis,M.bovis)可引起牛發生乳房炎、肺炎、關節炎和中耳炎等多種疾病。奶牛乳房炎是由于病原微生物感染或其他物理化學刺激等因素引起奶牛乳腺出現紅、腫、熱、痛等炎癥反應，是引起世界范圍內奶牛業經濟損失最嚴重的疾病。牛支原體性奶牛乳房炎可導致奶牛出現發熱等全身癥狀，乳區局部可出現紅腫熱痛等炎癥反應。牛支原體性奶牛乳房炎可導致牛奶產量急劇下降或停止產奶，奶中脂肪或蛋白含量降低，奶品質下降，嚴重影響奶牛生產性能。感染的奶牛乳腺變硬，可誘發乳腺組織纖維化發展，甚至導致乳腺萎縮，增加奶牛的淘汰率，提高生產成本。牛支原體性奶牛乳房炎傳染性極強，臨床上依靠以殺滅牛支原體為主要目的抗生素治療方案效果不佳，給奶牛養殖業造成巨大的經濟損失。

牛支原體已經成為制約規?；膛ｐB殖業發展的重要因素之一。然而，由于缺乏標準化實驗動物模型，給牛支原體相關疾病的防控、新型治療藥物和疫苗研發帶來巨大的障礙。目前，針對牛支原體的致病模型主要有犢牛、豚鼠的肺炎模型，為牛支原體呼吸道相關疾病的疫苗研發奠定了良好基礎。然而，針對牛支原體引起的奶牛乳房炎，尚缺乏有效的病理損傷評價模型。血乳屏障的結構特殊性使支原體乳房炎的治療方案不同于牛支原體肺炎模型，給奶牛乳房炎的抗炎治療方案以及抗生素替代藥品研發帶來障礙。因此，十分有必要構建一種易于操作和標準化的支原體乳房炎模型，為研發牛支原體奶牛乳房炎新型治療方案奠定技術基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一種牛支原體性小鼠乳腺炎模型的構建方法及其應用。

本發明提供了一種小鼠乳腺炎模型的構建方法，包括如下步驟：將感染液接種至泌乳期小鼠的乳腺；所述感染液是用無菌緩沖溶液懸浮牛支原體NMH7株得到的。

所述緩沖溶液具體可為磷酸鹽緩沖溶液。

所述小鼠具體可為CD-1小鼠。

接種量為每個乳腺接種感染液100μl以上。

接種量具體可為每個乳腺接種感染液100μl。

感染液中，牛支原體NMH7株的濃度為1×10⁶CFU/ml以上。

感染液中，牛支原體NMH7株的濃度具體可為1×10⁶CFU/ml。

具體的，接種方式可為通過小鼠乳導管接種。

接種方式也可為其他現有技術中的接種方式。

泌乳期小鼠為分娩4-7天后的小鼠。

泌乳期小鼠具體可為分娩5天后的小鼠。

時間選擇在分娩4-6天后，理由是小鼠分娩后，乳腺開始發育，在第4天乳腺腺泡發育成熟，最適于感染模型的制作。注射時間不宜過晚，因為小鼠泌乳期為14天，時間太晚，乳腺會退化，腺泡被脂肪組織代替，無法用于感染模型制作。在本模型中，選在分娩4-6天后，目的在于選擇乳腺腺泡最為成熟，功能最佳的狀態。

具體的，小鼠的乳腺為小鼠的第四對乳腺。小鼠一共有五對乳腺，其中第四對乳腺最為發達，適用于感染模型的建立。