[發(fā)明專利]RAA熒光法檢測單增李斯特菌的引物、探針和試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110288296.1
• 申請日: 2021-03-18
• 公開（公告）號: CN112852986A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔榮飛
• 申請（專利權(quán)）人: 石家莊市畜產(chǎn)品和獸藥飼料質(zhì)量檢測中心（石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量研究所）
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京圣州專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11818
• 代理人: 王振佳

1.一種RAA熒光法檢測單增李斯特菌的引物，其特征在于：引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物序列為CTAGCTCATTTCACATCGTCCATCTATTTGC，所述下游引物序列為CAAGTGGTAAGTTCCGGTCATCAATTACCGTTC。

2.一種RAA熒光法檢測單增李斯特菌的探針，其特征在于：所述探針序列為5’端序列/熒光報(bào)告基團(tuán)/A/THF/淬滅基團(tuán)/3’端序列，

其中：所述5’端的核苷酸序列為：CGTCCATCTATTTGCCWGGTAACGCRAGAAAT；

所述3’端的核苷酸序列為：TAATGTTTACGCYAAAG；

所述THF為1個(gè)堿基位置；所述熒光報(bào)告基團(tuán)選自FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5中的任一種；

所述淬滅基團(tuán)選自TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL中的任一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種RAA熒光法檢測單增李斯特菌的探針，其特征在于：所述探針的核苷酸序列為CGTCCATCTATTTGCCWGGTAACGCRAGAAATATTAATGTTTACGCYAAAG。

4.一種RAA熒光法檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：試劑盒包括RAA基礎(chǔ)熒光通用反應(yīng)試劑、反應(yīng)緩沖液、陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品、引物和探針；

引物為權(quán)利要求1中所述的RAA熒光法檢測單增李斯特菌的引物，探針為權(quán)利要求2中所述的RAA熒光法檢測單增李斯特菌的探針。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種RAA熒光法檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：所述引物中上游引物和下游引物的濃度均為0.05-0.1mmol/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種RAA熒光法檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：所述探針的濃度為0.02-0.05mmol/L。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種RAA熒光法檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)緩沖液包括以下含量組分：濃度為500mmol/L的Tris-HCl緩沖液(pH值7.4)、濃度為240mmol/L的MgAc和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的PEG10000。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種RAA熒光法檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：所述陽性質(zhì)控品中含有單增李斯特菌的基因組DNA；所述單增李斯特菌的基因組DNA的濃度為1×10⁶Copies/ul。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種RAA熒光法檢測單增李斯特菌的試劑盒，其特征在于：所述陰性質(zhì)控品為ddH₂O或純化水。