[發明專利]一種用于處理生物墨水的熱壓滅菌程序及其在人肝類器官3D模型構建中的應用

有效

• 申請號: 202110285467.5
• 申請日: 2021-03-17
• 公開（公告）號: CN112972712B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發明（設計）人: 吳春勇;陳俊根;張峻穎;康立峰;莊肯
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A61L2/07
• 分類號: A61L2/07;C12N5/071;C12N5/09
• 代理公司: 北京君有知識產權代理事務所(普通合伙) 11630
• 代理人: 焦麗雅

1.一種用于生物墨水滅菌處理的熱壓滅菌程序，其特征在于，包括以下步驟：控制升溫速率為5.5℃/min，滅菌條件為121℃，0.1MPa壓力，控制高壓蒸汽滅菌的時間為25min，隨后立即以5L/min的速率排氣，10min內排氣結束并降溫至100℃以下，立即取出，得到可打印的生物墨水；

其中，所述生物墨水配方為20％(w/v)明膠和4％(w/v)海藻酸鈉，純水為溶劑。

2.一種人肝細胞的3D培養體系，其特征在于，包括權利要求1所述滅菌程序滅菌后的人肝細胞生物墨水凝膠支架以及人肝細胞3D培養專用培養基；所述3D培養專用培養基為基礎培養基MEM添加10％(v:v)胎牛血清和1％(v:v)非必需氨基酸。

3.如權利要求2所述的人肝細胞的3D培養體系，其中，所述非必需氨基酸為890mg/l L-丙氨酸、1320mg/l L-天冬酰胺、1150mg/l L-脯氨酸、1330mg/l L-天(門)冬氨酸、1050mg/lL-絲氨酸、1470mg/l L-谷氨酸和/或750mg/l L-甘氨酸。

4.一種人肝細胞的3D培養方法，其特征在于，包括以下步驟，使用生物墨水裝載人肝細胞的3D培養體系培養肝細胞，所述生物墨水為權利要求1所述滅菌程序滅菌后的生物墨水。

5.如權利要求4所述的培養方法，其中包括以下具體步驟，將200μL低速離心后的肝細胞懸液與800μL37℃預熱的生物墨水混合，裝載至3D生物打印機上，打印多層格柵結構，打印完成后浸入CaCl₂溶液中交聯，隨后洗凈，轉移至12孔板中，加入培養液進行培養；混合后肝細胞的密度為1～5×10⁶個細胞/ml；細胞懸液與生物墨水混合體積比為1︰1～1︰4，所述細胞懸液密度為2.5×10⁷個細胞/ml，培養溫度為37℃，CO₂體積濃度為5％。

6.如權利要求5所述的培養方法，其中，肝臟細胞為人肝癌細胞HepG2細胞系。