[發(fā)明專利]柳杉非生物脅迫下熒光定量內(nèi)參基因及其專用引物和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110283554.7
• 申請日: 2021-03-16
• 公開（公告）號: CN112795631B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐進;崔潔冰;張瑩婷;胡海亮
• 申請（專利權(quán)）人: 南京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 南京申云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天;邢少華

本發(fā)明公開了柳杉非生物脅迫下熒光定量內(nèi)參基因及其專用引物和應(yīng)用，屬于植物分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。上述非生物脅迫包括干旱脅迫，熱害脅迫，低溫脅迫和鹽脅迫，本發(fā)明篩選并設(shè)計了15條候選內(nèi)參基因，通過5種算法(delta?CT、geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder)評估候選基因的穩(wěn)定性，獲得了適用于柳杉各非生物脅迫下熒光定量內(nèi)參基因，并設(shè)計了內(nèi)參基因的實時熒光定量PCR引物，該引物特異性強，擴增效率高，能夠大大的提高采用實時熒光定量檢測柳杉基因時的檢測效率，并提高了檢測結(jié)果的可信度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及柳杉非生物脅迫下熒光定量內(nèi)參基因及其專用引物和應(yīng)用，其中非生物脅迫包括干旱脅迫，熱害脅迫，低溫脅迫和鹽脅迫。

背景技術(shù)

柳杉(Cryptomeria fortunei Hooibrenk)，又名長葉孔雀松，為杉科柳杉屬喬木。非生物脅迫因子如干旱、熱害、低溫、鹽害等作用于植物時，會引起植物體內(nèi)發(fā)生一系列的生理代謝反應(yīng)。然而現(xiàn)在關(guān)于柳杉非生物脅迫下基因的研究還未曾有過報道。柳杉非生物脅迫情況下基因表達的差異的研究過程中，涉及到運用實時熒光定量技術(shù)分析和驗證基因的表達水平，需要穩(wěn)定可靠的內(nèi)參基因，因此篩選柳杉非生物脅迫條件下穩(wěn)定表達的內(nèi)參基因是實時熒光定量結(jié)果準確的關(guān)鍵因素。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明所要解決的第一技術(shù)問題是提供柳杉非生物脅迫下熒光定量內(nèi)參基因；本發(fā)明所要解決的第二技術(shù)問題是提供柳杉非生物脅迫下熒光定量內(nèi)參基因的專用引物；本發(fā)明所要解決的第三技術(shù)問題是提供上述內(nèi)參基因或?qū)Ｓ靡镌诹紵晒舛恐械膽?yīng)用。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

柳杉非生物脅迫下熒光定量內(nèi)參基因，非生物脅迫包括干旱脅迫、熱害脅迫、鹽脅迫和低溫脅迫。

進一步的，柳杉干旱脅迫下熒光定量內(nèi)參基因，為CYP和HSP70基因，CYP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；HSP70基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的柳杉干旱脅迫下熒光定量內(nèi)參基因的專用引物，

CYP基因的引物序列如下：

CYP正向引物：5’-TCTCGGGCAGCATTTCACGC-3’；

CYP反向引物：5’-AGCCGAAACTGGCGCCAACA-3’；

HSP70基因的引物序列如下：

HSP70正向引物：5’-AACGCAAGGGCTTTGAGAA-3’；

HSP70反向引物：5’-ACCTGGCACGGGTTATGGT-3’。

所述的柳杉干旱脅迫下熒光定量內(nèi)參基因在柳杉熒光定量中的應(yīng)用。

所述的柳杉干旱脅迫下熒光定量內(nèi)參基因的專用引物在柳杉熒光定量中的應(yīng)用。

進一步的，柳杉熱害脅迫下熒光定量內(nèi)參基因，為CYP和UBC基因，CYP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；UBC基因的核苷酸序列如SEQ D NO.3所示。

所述的柳杉熱害脅迫下熒光定量內(nèi)參基因的專用引物，

CYP基因的引物序列如下：

CYP正向引物：5’-TCTCGGGCAGCATTTCACGC-3’；

CYP反向引物：5’-AGCCGAAACTGGCGCCAACA-3’；

UBC基因的引物序列如下：

UBC正向引物：5’-CTCGCAGAATCATAAAGGAAACAC-3’；