[發明專利]負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠的制作工藝

在審

• 申請號: 202110282820.4
• 申請日: 2021-05-17
• 公開（公告）號: CN113144293A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 李美蓉;付小兵;呂強
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/22;A61L27/50;A61L27/52;C08J3/075;C08L89/00
• 代理公司: 石家莊領皓專利代理有限公司 13130
• 代理人: 張杏珍

1.負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠的制作工藝，其特征在于，包括以下步驟：

S1、絲素納米纖維水凝膠的制作；

S2、臍帶間充質干細胞外泌體的制作；

S3、負載臍帶間充質干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠的制作：將所述臍帶間充質干細胞外泌體與所述納米纖維水凝膠混合，得到負載外泌體絲素納米纖維水凝膠的溶液。

2.根據權利要求1所述的負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠的制作工藝，其特征在于，所述步驟S1具體包括以下步驟：

S11、蠶絲蛋白溶液在55～60℃環境下靜置24h；

S12、蠶絲蛋白溶液濃縮形成亞穩態納米顆粒后，加入用去離子水稀釋；

S13、將稀釋的蠶絲蛋白溶液在55～60℃恒溫環境下靜置18～24h；

S14、重復步驟S12、S13三次，得到濃度較高的蠶絲蛋白納米纖維，置于4℃保存。

3.根據權利要求1所述的負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠的制作工藝，其特征在于，所述步驟S2具體包括以下步驟：

S21、將UC-MSCs培養至融合，在無血清培養基中孵育；

S22、收集條件培養液，離心去除細胞碎片，收集上清進行濃縮；

S23、離心2次；

S24、棄上清液后，獲得外泌體，重懸于磷酸緩沖鹽溶液中；

S25、測定分離的外泌體的蛋白濃度并在-80℃保存。

4.根據權利要求2所述的負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠的制作工藝，其特征在于，所述步驟S11中，蠶絲蛋白溶液的濃度為5～6wt％；所述步驟S12中，蠶絲蛋白溶液濃縮至15～20wt％，用去離子水稀釋至低于1wt％。

5.根據權利要求3所述的負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠的制作工藝，其特征在于，所述步驟S21中，孵育時間為70～75h；所述步驟S22中，濃縮10倍；所述步驟S23中，10萬g離心2次，第一次離心60～70min，第二次離心2～3h。

6.根據權利要求1所述的負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠的制作工藝，其特征在于，所述步驟S3中，所述絲素納米纖維水凝膠濃度為0.8～1wt％。

7.根據權利要求1所述的負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠的制作工藝，其特征在于，所述步驟S3中，所述臍帶間充質干細胞外泌體與所述納米纖維水凝膠的質量體積比為(0.2～0.3):1。

8.根據權利要求1～7任意一項所述的制作工藝制作的負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠。

9.權利要求8所述的負載干細胞外泌體的絲素納米纖維水凝膠在組織修復中的應用。