[發(fā)明專利]CAS9-核酸復(fù)合物及其相關(guān)用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110281667.3
• 申請日: 2014-01-15
• 公開（公告）號: CN113005148A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 大衛(wèi)·S·維斯;阿拉什·格拉蔻伊;蒂莫西·桑普森;艾琳·阿萊納·普萊斯
• 申請（專利權(quán)）人: 愛默蕾大學(xué)
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/82;C12N9/22;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 王瑋瑋;武晶晶

1.一種重組核酸組合物，其包含：

包含編碼細(xì)菌Cas9蛋白的Cas9基因的序列，其中所述細(xì)菌Cas9蛋白是由SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的變體編碼的新殺手弗朗西斯菌(Francisella novicida)Cas9，所述SEQID NO:9的變體與SEQ ID NO:9編碼相同的氨基酸，其中編碼所述新殺手弗朗西斯菌Cas9的序列或編碼所述新殺手弗朗西斯菌Cas9的載體被引入到真核細(xì)胞中；和

編碼RNA的序列，其中該RNA包含

被配置成與所述真核細(xì)胞中表達(dá)的新殺手弗朗西斯菌Cas9蛋白結(jié)合的第一區(qū)段并且所述第一區(qū)段包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11，和

被配置成結(jié)合靶核酸序列的第二區(qū)段，

其中所述靶核酸序列是與癌基因相關(guān)的mRNA或微RNA，并且其中向所述真核細(xì)胞中引入所述重組核酸組合物導(dǎo)致與所述細(xì)胞中的所述基因組RNA或mRNA雜交或?qū)е滤龌蚪MRNA或mRNA在所述細(xì)胞中的降解。

2.一種重組載體，其包含：

包含編碼細(xì)菌Cas9蛋白的Cas9基因的序列，其中所述細(xì)菌Cas9蛋白是由SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的變體編碼的新殺手弗朗西斯菌(Francisella novicida)Cas9，所述SEQID NO:9的變體與SEQ ID NO:9編碼相同的氨基酸，其中編碼所述新殺手弗朗西斯菌Cas9的序列或編碼所述新殺手弗朗西斯菌Cas9的載體被引入到真核細(xì)胞中；和

編碼RNA的序列，其中該RNA包含

被配置成與所述真核細(xì)胞中表達(dá)的新殺手弗朗西斯菌Cas9蛋白結(jié)合的第一區(qū)段并且所述第一區(qū)段包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11，和

被配置成結(jié)合靶核酸序列的第二區(qū)段，

其中所述靶核酸序列是與癌基因相關(guān)的mRNA或微RNA，并且其中向所述真核細(xì)胞中引入所述重組核酸組合物導(dǎo)致與所述細(xì)胞中的所述基因組RNA或mRNA雜交或?qū)е滤龌蚪MRNA或mRNA在所述細(xì)胞中的降解。

3.權(quán)利要求1所述的重組核酸組合物或權(quán)利要求2所述的重組載體在制備治療需要其的受試者中的癌癥的藥物中的用途。

4.一種重組載體，其包含

包含編碼細(xì)菌Cas9蛋白的Cas9基因的序列，其中所述細(xì)菌Cas9蛋白是由SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的變體編碼的新殺手弗朗西斯菌(Francisella novicida)Cas9，所述SEQID NO:9的變體與SEQ ID NO:9編碼相同的氨基酸，其中編碼所述新殺手弗朗西斯菌Cas9的序列或編碼所述新殺手弗朗西斯菌Cas9的載體被引入到真核細(xì)胞中；和

靶向表達(dá)PD-1/PD-L1的mRNA的gRNA。

5.一種重組核酸構(gòu)建體，其包含

包含編碼細(xì)菌Cas9蛋白的Cas9基因的序列，其中所述細(xì)菌Cas9蛋白是由SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的變體編碼的新殺手弗朗西斯菌(Francisella novicida)Cas9，所述SEQID NO:9的變體與SEQ ID NO:9編碼相同的氨基酸，其中編碼所述新殺手弗朗西斯菌Cas9的序列或編碼所述新殺手弗朗西斯菌Cas9的載體被引入到植物細(xì)胞中；和

靶向RNA，其受在植物細(xì)胞中起作用的啟動子序列的控制并且靶向基本上參與植物有害生物的生長和發(fā)育的序列。

6.如權(quán)利要求5所述的重組核酸構(gòu)建體，其中所述靶向RNA靶向在所述植物有害生物的存活力、生長、發(fā)育、感染性中起重要作用的蛋白質(zhì)的mRNA。

7.如權(quán)利要求5或6所述的重組核酸構(gòu)建體在制備轉(zhuǎn)基因植物中的用途，其中所述重組核酸構(gòu)建體被引入到植物中以創(chuàng)建靶向植物有害生物的所述轉(zhuǎn)基因植物。