[發明專利]一種抗腫瘤僵蠶溶繭酶抑制劑及其純化方法和應用

有效

• 申請號: 202110281207.0
• 申請日: 2021-03-16
• 公開（公告）號: CN113214375B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 王厚偉;竇彥玲;田景振;徐凌川
• 申請（專利權）人: 山東中醫藥大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/16;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

本發明公開了一種抗腫瘤僵蠶溶繭酶抑制劑及其純化方法和應用，抗腫瘤僵蠶溶繭酶抑制劑N端前10個氨基酸序列如SEQ NO：1所示，氨基酸全序列如SEQ NO：2所示，DNA序列如SEQ NO：3所示。將僵蠶水煎液凍干粉溶于緩沖溶液中，經硫酸銨分步鹽析法獲得硫酸銨沉淀物，采用以家蠶溶繭酶為配體的親和色譜進行分離獲得初步純化的僵蠶溶繭酶抑制劑，經凝膠過濾色譜分離獲得更高純度的僵蠶溶繭酶抑制劑，經快速蛋白液相色譜分離獲得高純度僵蠶溶繭酶抑制劑。本發明首次從僵蠶水煎液中分離純化出僵蠶溶繭酶抑制劑，解決了僵蠶水煎液成分復雜，抗肝癌藥效物質及其含量不明確，無法適應現代臨床注射或局部穿刺給藥的缺陷，具有顯著抑肝癌細胞增殖活性。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種活性蛋白，特別地，涉及一種抗腫瘤僵蠶溶繭酶抑制劑及其純化方法和應用。

背景技術

原發性肝癌惡性程度高、預后差、發病率與死亡率高，已上升為我國第二位癌癥殺手，研發有效治療肝癌的新藥始終是生物醫學技術領域需要迫切解決的問題。中藥僵蠶是蠶蛾科昆蟲家蠶（Bombyxmori Linnaeus）4～5齡的幼蟲感染白僵菌（Beauveriabassiana(Bals.) Vuillant）而致死的干燥體，被列入中國藥典，具有息風止痙，祛風止痛，化痰散結等功效。僵蠶單獨或與其它中藥配伍用于治療多種腫瘤性疾病。在中國的一些地區僵蠶作為一種民間藥用于治療癌癥。關于僵蠶的抗腫瘤作用已有一些文獻報道。僵蠶乙醇提物對體外培養的Hela細胞增殖具顯著抑制作用。僵蠶中麥角甾醇、β-谷甾醇、棕櫚酸3 種成分具有抗小鼠黑素瘤細胞B16-F10和人黑色素瘤細胞A375增殖活性。僵蠶水煎煮提取物對小鼠肉瘤細胞S180、小鼠艾氏腹水瘤細胞，以及人肝癌細胞體外增殖有抑制作用（Cho HD, MinHJ, Won YS, et al. Solid state fermentation process with Aspergilluskawachiienhances the cancer-suppressive potential of silkworm larva in hepatocellularcarcinoma cells[J]. BMC Complement Altern Med, 2019, 19(1): 241.）；以僵蠶水煎劑灌胃，制備大鼠含藥血清，該血清能抑制肝癌細胞Hepa1-6 體外增殖與侵襲（Yuan L,Bing Z, Han J, et al. Study on the anti-tumor mechanism related to immunemicroenvironment of BombyxBatryticatus on viral and non-viral infections ofhepatocellular carcinoma[J]. Biomed Pharmacother, 2020, 124: 109838.）。

綜上，僵蠶水煎液及其制備的含藥血清對人肝癌細胞體外增殖有抑制作用。但是，僵蠶水煎液成分復雜，抗肝癌藥效物質及其含量不明確，無法適應現代臨床注射或局部穿刺給藥的應用要求，特別是有關僵蠶抗腫瘤活性小分子量蛋白組分的研究未見報道。

因此，從僵蠶水煎液中提取或分離具有抗肝癌細胞活性蛋白組分具有重要意義。

發明內容

針對現有技術中存在的僵蠶水煎液成分復雜，抗肝癌藥效物質及其含量不明確的問題，本發明提供了一種活性蛋白，特別地，涉及一種抗腫瘤僵蠶溶繭酶抑制劑及其純化方法和應用，提取純化的抗腫瘤僵蠶溶繭酶抑制劑具有體內、外抑制SMCC-7721人肝癌細胞增殖活性，解決了現有技術中抗肝癌候選藥物發現的技術難題。

本發明通過以下技術方案實現：