[發明專利]一種纈氨酸制備方法

有效

• 申請號: 202110278728.0
• 申請日: 2021-03-16
• 公開（公告）號: CN113025670B
• 公開（公告）日: 2022-10-21
• 發明（設計）人: 馬祥亮;劉樹蓬;劉磊;張大偉;余軍
• 申請（專利權）人: 安徽華恒生物科技股份有限公司;巴彥淖爾華恒生物科技有限公司;合肥華恒生物工程有限公司
• 主分類號: C12P13/08
• 分類號: C12P13/08;C12N1/20;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種纈氨酸制備方法，包括下述步驟：（1）將纈氨酸生產菌按照接種量為1?10%接種到LB培養基中，將其培養體系置于180?220r/min、35?37℃、pH為6?7條件下，培養至OD值3?4，得到一級種子液；（2）將一級種子液按照1?10%接種量轉接至合成培養基中，將其置于180?220r/min、35?37℃、pH為6?7條件下，培養至OD值3?4，得到二級種子液；（3）將二級種子液按接種量1?10%接種到發酵培養基中，將其置于30~37℃、pH為6?7下發酵培養至生長穩定期，繼續在38~45℃、pH為6?7條件下發酵培養至殘糖量不高于2g/L，制得纈氨酸發酵液。本發明在保證纈氨酸轉化率的同時提高糖酸生產率，并能降低產物中雜酸的含量，以降低后續提純難度。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種纈氨酸制備方法。

背景技術

纈氨酸為機體必需氨基酸和營養物質，被廣泛應用于食品、醫藥、化妝品、飼料等領域的食品添加劑、飼料添加劑、營養增補劑、風味劑、化妝品添加劑、藥物（如抗生素、除草劑等）的制備前體等，市場前景十分廣闊。

CN110607268A公開了一種纈氨酸發酵基因工程菌及其發酵方法，該方法的發酵周期為40h，纈氨酸產量為80g/L。但該方法存在發酵周期長、糖酸轉化率低（30-40%）、產物中雜酸含量偏高等缺陷。

為此，需要研究開發糖酸轉化率高、發酵周期短、雜酸含量少的纈氨酸發制備方法。

中國專利申請（CN202010401422.5、CN202010466347.0、CN202010460035.9）公開的內容作為理解本發明必不可少的內容。

發明內容

本發明的目的在于提供一種纈氨酸制備方法，包括下述步驟：

（1）將纈氨酸生產菌按照接種量為1-10%接種到LB培養基中，將其培養體系置于180-220r/min、35-37℃、pH6-7條件下培養至OD值3-4，得到一級種子液；

（2）將一級種子液按照1-10%接種量轉接至合成培養基中，將其置于180-220r/min、35-37℃、pH6-7條件下培養至OD值3-4，得到二級種子液；

（3）將二級種子液按接種量1-10%接種到發酵培養基中，將其置于30~37℃、pH為6-7下發酵培養至生長穩定期，繼續在38~45℃、pH為6-7條件下發酵培養至殘糖量不高于2g/L，制得纈氨酸發酵液。

本發明優選的技術方案中，步驟（1）中的纈氨酸生產菌選自野生大腸桿菌、重組大腸桿菌、野生黃色短桿菌、重組黃色短桿菌中的任一種。

本發明優選的技術方案中，所述纈氨酸生產菌選自Sval031菌株、Sval049菌株、Sval065菌株中的任一種。

本發明優選的技術方案中，所述Sval031菌株（保藏編號：CGMCC No.19456）于2020年3月6日提交保藏，分類命名：大腸埃希氏菌（Escherichia coli），保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

本發明優選的技術方案中，所述Sval049菌株（保藏編號：CGMCC No.19457）于2020年3月6日提交保藏，分類命名：大腸埃希氏菌（Escherichia coli），保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

本發明優選的技術方案中，所述Sval065菌株（保藏編號：CGMCC No. 19458）于2020年3月6日提交保藏，分類命名：大腸埃希氏菌（Escherichia coli），保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。