[發明專利]一種CAR-T細胞灌流培養方法

有效

• 申請號: 202110278284.0
• 申請日: 2021-03-16
• 公開（公告）號: CN112662631B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 石琳;謝志明;楊曉燕;靳霞;田皞靚;孟歡;朱慧娟;黃林生;李新靈
• 申請（專利權）人: 合源生物科技（天津）有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/0783
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張擁;姜建成

1.一種CAR-T細胞灌流培養方法，其包括以下步驟：

1）從受試者單采血細胞中分離獲得外周血單個核細胞，然后從外周血單個核細胞中分選獲得T細胞；

2）將分離的T細胞用CD3/CD28刺激磁珠進行激活處理；

3）采用慢病毒載體感染激活后的T細胞；

4）對慢病毒感染后的T細胞進行灌流培養，收獲CAR-T細胞；

其中使用不含動物源成分的無血清培養基對CAR-T細胞進行培養，所述不含動物源成分的無血清培養基的組成為：AIM-V+(3~9)%ISR，所述ISR為免疫細胞血清替代物；

所述灌流培養包括：

（1）當細胞密度為(0.5~1.1)×10⁶個細胞/mL時，灌流速率為0.4個生物反應器體積/天；當細胞密度≥2×10⁶個細胞/mL時，灌流速率為1.0個生物反應器體積/天；

或者（2）當細胞密度在(1.1~2)×10⁶個細胞/mL時，灌流速率為0.8個生物反應器體積/天；當細胞密度≥2×10⁶個細胞/mL時，灌流速率為1.0個生物反應器體積/天；

或者（3）當細胞密度為(0.5~1.1)×10⁶個細胞/mL時，灌流速率為0.4個生物反應器體積/天；當細胞密度在(1.1~2)×10⁶個細胞/mL時，灌流速率為0.8個生物反應器體積/天；當細胞密度≥2×10⁶個細胞/mL時，灌流速率為1.0個生物反應器體積/天。

2.根據權利要求1所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，所述不含動物源成分的無血清培養基的組成為：AIM-V+(4~7)%ISR。

3.根據權利要求2所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，所述不含動物源成分的無血清培養基的組成為：AIM-V+5%ISR。

4.根據權利要求1所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，在步驟4）中，當細胞密度≥預設值時，開始灌流培養。

5.根據權利要求4所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，所述預設值為(0.3~1.2)×10⁶個細胞/mL。

6.根據權利要求5所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，所述預設值為(0.4~1.0)×10⁶個細胞/mL。

7.根據權利要求6所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，所述預設值為0.5×10⁶個細胞/mL。

8.根據權利要求4所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，在步驟4）中，在細胞密度達到預設值之前，采用補液培養，其中補液培養過程中以(0.3~1)×10⁶個細胞/mL的密度為補液標準進行補液，通氣量為0.1L/分鐘~1L/分鐘，轉速為4rpm-12rpm，通氣為壓縮空氣加(1~10)%CO₂。

9.根據權利要求8所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，在步驟4）中，在補液培養之前包括：

待感染后的T細胞數量達到(5~15)×10⁷個細胞，將感染后的T細胞轉入Xuri生物反應器進行補液培養。

10.根據權利要求1所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，灌流培養過程中的通氣量為0.3L/分鐘~0.8L/分鐘，轉速為5rpm~15rpm，通氣為壓縮空氣加(1~10)%CO₂。

11.根據權利要求10所述的CAR-T細胞灌流培養方法，其中，灌流培養過程中的通氣量為0.4L/分鐘~0.6L/分鐘，轉速為8rpm~12rpm，通氣為壓縮空氣加(3~6)%CO₂。