[發明專利]大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白的重組載體、基因工程菌及其應用

在審

• 申請號: 202110278115.7
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN112941095A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 陳翠翠;梁煥坤;昝潔;賴宏銳;何瑩;郭桂鈴;李來慶;寧波
• 申請（專利權）人: 廣州優迪生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/46;C12N1/21;C07K14/14;G01N33/569;C12R1/19
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發明涉及基因工程領域，具體公開了一種大熊貓輪狀病毒CH?1毒株VP7蛋白的重組載體、基因工程菌及其應用。本發明的重組載體，含有大熊貓輪狀病毒CH?1毒株VP7蛋白的編碼基因。含有本發明重組載體的工程菌表達的大熊貓輪狀病毒CH?1毒株VP7蛋白具有良好的生物活性和免疫原性，蛋白表達量大，極大降低了生產成本，為大熊貓輪狀病毒(giant panda rotavirus，GPRV)CH?1毒株的檢測試劑盒的研制奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及基因工程領域，尤其是涉及一種大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白的重組載體、基因工程菌及其應用。

背景技術

大熊貓輪狀病毒(giant panda rotavirus，GPRV)CH-1毒株首次由王成東等于2009年首次從大熊貓腹瀉糞便中檢測并分離出。該毒株可以引起幼齡大熊貓(5～11月齡)發生傳染性及頑固性腹瀉，導致多器官衰竭死亡，對大熊貓種群的擴大產生一定的影響。目前尚無有效疫苗和特效藥物對GPRV感染進行防治，這對大熊貓的健康造成了嚴重威脅。

輪狀病毒屬于呼腸弧病毒科、輪狀病毒屬，其基因組含11個節段的dsRNA。該病毒的形態呈車輪狀，無囊膜，由三層蛋白衣殼組成，分別是VP7、VP4和VP6蛋白。VP7是由基因9(或7、8)編碼的一種糖蛋白，是輪狀病毒的重要保護抗原。VP7蛋白能夠獨立誘導機體產生中和抗體，決定病毒的G血清型。但目前，關于大熊貓輪狀病毒(giant panda rotavirus，GPRV)CH-1毒株的體外快速檢測試劑盒尚無，因此建立大熊貓輪狀病毒(giant pandarotavirus，GPRV)CH-1毒株VP7蛋白的體外表達系統對大熊貓輪狀病毒(giant pandarotavirus，GPRV)CH-1毒株的快速檢測方法研制至關重要。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白的重組載體、基因工程菌及其應用，含有本發明重組載體的基因工程菌表達的大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白具有良好的生物活性和免疫原性。

本發明的第一方面，提供了一種重組載體，其中，含有大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白的編碼基因。

作為本發明所述重組載體的優選實施方式，所述重組載體為將所述大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白的編碼基因插入到出發載體上得到的重組載體。所述的出發載體可以為本領域常規的載體，如市售的質粒、噬菌體或病毒載體等。

作為本發明所述重組載體的優選實施方式，所述出發載體為質粒。所述質粒優選為pColdⅡ。

本發明的第二方面，提供了一種表達大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白的基因工程菌，基因工程菌含有大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白的編碼基因。

作為本發明所述基因工程菌的優選實施方式，所述基因工程菌為將含有大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白編碼基因的重組載體導入宿主菌得到的。

作為本發明所述基因工程菌的優選實施方式，所述宿主菌為大腸桿菌。所述宿主菌優選為大腸桿菌pTf16/BL21(DE3)感受態。

作為本發明所述基因工程菌的優選實施方式，所述大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白的編碼基因為核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的基因。

作為本發明所述基因工程菌的優選實施方式，所述大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白為氨基酸序列為SEQ ID NO:2所示的蛋白質，或SEQ ID NO:2經過一個或幾個氨基酸殘基取代、缺失或添加后具有大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白活性的蛋白質。

本發明的第三方面，提供了一種表達大熊貓輪狀病毒CH-1毒株VP7蛋白的基因工程菌的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將上述的重組載體導入到宿主菌中。